Фото тима тома: Мультсериал «Тима и Тома» – детские мультфильмы на канале Карусель

Следующая информация содержит спойлеры.Чтобы просмотреть их, нажмите на тег [show].
После активации близнецов ТБаббер телепортируется в церковь. Стоя на трибуне, он занимает место пастора МакЭлроя, когда тот проповедует невидимой аудитории. Внезапно появляется темная парящая фигура и разрушает церковь, но пастор продолжает молиться. Двери распахиваются, открывая близнецов. Тим небрежно идет по проходу, а пастор теряет дар речи. Том телепортируется перед пастором и предположительно душит его до смерти.

Alibaba вложится в сериал о бегемотике и слоненке от студии «Смешариков» — РБК

Технологии и медиа , 06 окт 2021, 07:00

Чем российский мультфильм заинтересовал китайскую аудиторию

Alibaba Group профинансирует производство новых сезонов анимационного сериала «Тима и Тома».

Взамен принадлежащая группе платформа Youku Kids получит эксклюзивные права на трансляцию трех новых сезонов в Китае

Кадр из сериала «Тима и Тома» (Фото: Студия Анимации «Петербург»)

Принадлежащая Alibaba Group китайская платформа онлайн-видео Youku Kids заключила соглашение о производстве трех новых сезонов сериала «Тима и Тома» с группой «Рики». Об этом РБК сообщил управляющий директор «Рики» Марк Завадский. Представитель Youku Kids подтвердил факт соглашения.

«Тима и Тома» — комедийный анимационный сериал, ориентированный на дошкольников в возрасте от трех до пяти лет. В центре сюжета — бегемотик Тима и слоненок Тома. Авторы идеи — Ольга Титова и Илья Березницкас, продюсирует сериал Илья Попов — соавтор идеи «Смешариков», флагманского проекта «Рики». Производством занимается студия компьютерной анимации «Петербург».

В прокат уже вышло 104 эпизода длительностью пять минут каждый. Количество подписчиков канала «Тима и Тома» на YouTube превышает 300 тыс., количество просмотров — 211 млн.

В рамках нового соглашения Alibaba Group, по словам Завадского, инвестирует «несколько миллионов долларов»: 52 эпизода в форматах 3D и 2D выйдут в июле 2023 года, следующие 104 — в 2024–2025 годах. Youku Kids получит новые сезоны на эксклюзивных правах и будет продавать их другим каналам, а также заниматься лицензированием и делиться доходами от продаж. Права на Россию и остальной мир останутся у «Рики».

«Обучение через игру и здоровые отношения со взрослыми — две темы, которые мы выбрали для следующего сезона», — добавил Завадский.

«МУЛЬТ» представляет сериал «Тима и Тома»

Российский детский телеканал «МУЛЬТ» осенью покажет зрителям новый анимационный сериал «Тима и Тома». Премьера первой серии мультфильма состоится на широких экранах российских кинотеатров 19 сентября в рамках проекта «МУЛЬТ в кино». В октябре начнется показ сериала в эфире телеканала.

«Тима и Тома» — это 5-минутные истории из жизни бегемотика Тимы и слоненка Томы — обаятельных и трогательных малышей, познающих окружающий их мир, в котором возможно всё: встретить пришельца из космоса, найти таинственную пещеру, прямо на глазах вырастить дерево и, играя, превратиться в силача.

Создателями мультсериала стали ГК «Рики» и Студии компьютерной анимации «Петербург» (авторы сериала «Смешарики»). «Сериал «Тима и Тома» во многом отличается от других анимационных проектов. Он ориентирован на дошкольников — фантазёров и мечтателей, для которых мир полон приключений, а границы между хорошим и плохим пока размыты. Помочь детям найти эту грань и самостоятельно прийти к правильным решениям, но сделать это тонко, без наставлений и скучных правил — одна из основных задач сериала, с которой нам удалось справиться», — говорит генеральный продюсер ГК «Рики» Илья Попов.

Все объекты и герои сериала выполнены в 3D-технике, а озвучены главные персонажи реальными детьми — Сережей Голубцовым и Сашей Борисовой, благодаря чему голоса Тимы и Томы приобрели краски и неподдельные детские интонации.

Телеканал «МУЛЬТ» входит в группу «Цифровое телевидение» (ВГТРК и «Ростелеком»), которая объединяет 17 телеканалов разной тематики. «МУЛЬТ» — единственный тематический телеканал в России, который производит собственные мультипликационные сериалы. «Тима и Тома» станет четвертым оригинальным проектом телеканала.

С момента запуска 1 июня 2014 года «МУЛЬТ» показал около 60 премьерных эпизодов своих мультсериалов «Аркадий Паровозов спешит на помощь», «Бумажки» и «Ми-Ми-Мишки».

С марта 2015 года телеканал устраивает премьеры новых серий собственных сериалов, а также других российских мультфильмов в кинотеатрах в проекте «МУЛЬТ в кино».

Ошибка 404

Детский аниматор в Москве и МО
Развлекательные программы на праздник
Квесты и тимбилдинг для подростков
+7 925 753 15 13

заказать звонок

3200р/ч(буд) 3500р/ч(вых)

только зимой 5000р\2ч

всего за 5000р/2ч

3200р/ч(буд) 3500р/ч(вых)

только зимой 5000р\2ч

3200р/ч(буд) 3500р/ч(вых)

только зимой 5000р\2ч

Previous Next
Новости нашей компании
Дорогие друзья, приглашаем Вас и Ваших детей в наше уютное Антикафе «вМесте» в г. Электроугли ул.Парковая д.1, 2 этаж.
Здесь Вас ждут:

Аниматоры и Ведущие

Караоке

Настольные игры (мафия, монополия)

Организация банкетов

День рождения «Под ключ»

Аренда помещения

Чай/кофе и сладости для гостей

У нас по-настоящему весело и уютно! Заходите провести время с детьми. Вы отдыхаете, дети играют.

подробнее о кафе

Мы в ВКонтакте и инстаграмме
Еще больше фото и видео с нашими программами!
Еще больше новостей о наших акциях, скидках!
Еще больше отзывов наших клиентов!
И многое другое!
Подпишитесь на наши новости и предложения!
зайти в группу ВКонтакте

зайти в Instagram

Наши преимущества
Города в которых мы проводим праздники
Москва и Московская область
Тима и Тома (Серия 1.
Не спится) — Мультфильмы
Слоник Тома и ее лучший друг бегемотик Тима живут в красочной жизнерадостной деревушке Пряники. Каждый день у них происходят новые приключения, новые открытия и появляются новые друзья. В этом месте нет места скуки, ведь друзьям под силу оживить свои самые причудливые фантазии.

Они учатся, вместе познают этот невероятный мир и делятся своим опытом с юными зрителями, для которых мультфильм будет иметь не только развлекательный, но и познавательный характер.

Вместе с детьми Тима и Тома учатся взаимодействовать с этим постоянно меняющимся миром. Они открывают для себя, как отличать добро от зла и находить выход из любой самой запутанной на первый взгляд ситуации.

Мультипликационный сериал Тима и Тома — это творение анимационной компании Рики, одной из лидирующих компаний по созданию и продвижению анимации для всей семьи. Также был запущен дополнительный проект Спроси у Томы, в котором слоненок отвечает самым маленьким зрителям на интересующие многих малышей вопросы.
Он рассчитан на самых любознательных искателей ответов.

Также по мотивам сериала планируется выход полнометражного мультфильма Сказочный переполох, в котором рассказывается увлекательная история Томы, случайным образом попавшей в сказочный мир. Героиня, которая страшно не любит скучные книги, однажды видит удивительное свечение в одной из них. И, открыв ее, переносится в невиданный до этого времени край. С этого и начинается ее увлекательное путешествие.

Вскоре после премьеры в России мультфильм появился на китайском видеохостинге YouKu. Как и у себя на родине проект снискал в Китае головокружительную популярность. На сегодняшний день у мультсериала более двух миллиардов просмотров.

Работа над многосерийной анимационной лентой стала дебютом в озвучке для Александра Борисова и Марии Бахуриной.
Слоник Тома и ее лучший друг бегемотик Тима живут в красочной жизнерадостной деревушке Пряники. Каждый день у них происходят новые приключения, новые открытия и появляются новые друзья. В этом месте нет места скуки, ведь друзьям под силу оживить свои самые причудливые фантазии. Они учатся, вместе познают этот невероятный мир и делятся своим опытом с юными зрителями, для которых мультфильм будет им

Мультсериал Тима и Тома | смотреть сборник
Страна:
Россия
Мультик Тима и Тома обожают смотреть весёлые, любознательные малыши. А вместе с ними окунуться в приключения бегемотика и слоненка смогут и родители!
Тима и Тома смотреть
сезон
~~~1 сезон2 сезон
серия
1. Не спится2. Кошелёк3. Посуда4. Силачи5. Кто смелый?6. Девчонок не берем7. День рождения8. Барабан9. Большая уборка10. Грибной дождик11. Конкурс рисунков12. Новогоднее чудо13. Этикет14. Пришелец15. Птичка16. Снежная история17. Хрум-хрум18. Сливы19. Ночной воришка20. Плохая примета21. Клад22. Кривые цветы23. Микробы атакуют24. Поход25. Кто сильнее?26. Всё наоборот27. Прятки28. Пейзаж29. И так сойдёт30. Ветрянка из банки31. Принцесса32. Поручение33. Укротители34. Чудо-песенка35. Артистка36. Раскопки37. Карета38. Мешок слона39. Дочки-матери40. Остров41. В гости42. Не по плану43. Подарки44. Лучший нос45. Секрет46. Раиса47. Брошенное дело48. Метод тыка49. Очки50. Невезучий день51. Горячо-холодно52. В космос1. Бима и Бома2. Как спасать спасателей?3. Грязножаба4. Даешь вредняшки!5. Братец Том6. Призраки непосаженных морковок7. Самая лучшая история8. Тренер9. Коллекция10. Аквапарк11. Ковёр-самолёт12. Пятый дубль13. Пугало14. Волк15. Модный дом16. Тропинки17. Рецепт18. Мыква19. Компас20. Три поросёнка21. Будильник22. Чудеса23. Разрешательные знаки24. По следам динозавра25. Звёздный час26. Служба поддержки27. Превращатор28. Во всё игралка29. Водолечение30. Машина времени31. Удивень-трава32. Мастер снежинок33. Только со мной34. Букашка35. Выше всех36. Экспресс-календарь37. Поехали!38. Подарок для поросят39. В чем сила?
Тима и Тома – друзья навсегда
Мультсериал Тима и Тома повествует о двух неразлучных друзьях, которые живут в маленьком уютном поселке «Пряники». Оригинальная 3D-анимация в пастельных тонах погружает зрителя в мир детских фантазий, наполненный безобидными шалостями, забавными приключениями.
Бегемотик Тима – любознательный, начитанный мальчик, готовый рассказать обо всем на свете, ответить на любой вопрос. Он спокойный, рассудительный, предпочитает обдумывать свои планы перед воплощением. Мечтательный Тима готов прийти на помощь в любой ситуации.
Слоненок Тома – беззаботная веселая девочка, вечно находящаяся в поиске приключений. Она готова на любую авантюру, редко заранее обдумывает последствия шалостей. Иногда, чтобы выбраться из сложной ситуации, ей приходится пользоваться помощью друга.
Почему дети любят Тиму и Тому?
Мультики Тима и Тома популярны благодаря увлекательному сюжету. Они ориентированы на дошкольников, поэтому учитывают особенности детского восприятия: здесь нет кричащих цветов, чрезмерно быстрых движений, сложной лексики, лишних деталей. Серии можно смотреть в любом порядке, ведь каждая из них – самостоятельное повествование.
Дети легко узнают себя в любимых персонажах. Обаятельные правдоподобные характеры понравятся зрителям любого возраста. Тима с Томой сталкиваются с эмоциями и ситуациями, через которые проходят все малыши. Это помогает юным зрителям чувствовать поддержку, смелее открывать окружающий мир, отличать добро от зла, учиться настоящей дружбе.
4 самых интересных факта о мультфильме
«Тима и Тома» – единственный российский мультсериал, полностью озвученный детьми. В его создании принимают участие юные актеры музтеатра «Радуга».
Изначально оба персонажа задумывались мальчиками, но сценаристы изменили состав героев, чтобы сделать сюжет разнообразнее, интереснее для малышей.
Мультфильм создан в соответствии с концепцией «мир без насилия», поэтому здесь вы не увидите отрицательных персонажей или плохих поступков.
Сериал завоевал внимание многомиллионной детской аудитории не только в России, но и за границей. Права на его показ покупают европейские страны, а в Китае мультфильм вошел в топ самых популярных шоу для малышей.
Хотите познакомиться с очаровательными героями сериала? Тогда стоит смотреть Тима и Тома все серии!
Смотрите также
Перейти в раздел мультфильмы для детей
Лучшие мультфильмы 2021 года (и аниме тоже есть!) | Кино

В 2021-м анимационные полнометражные фильмы стали чуть смелее. Больше экспериментов с формой и техниками (спасибо успеху «Человека-Паука: Через вселенные»), больше подчёркнуто взрослых проектов. И даже типичные мультфильмы Pixar и Disney немного отходят от привычных формул!

Впору вышел и наш топ.

А где «Аркейн»? А вот:

Ацтекское фэнтези, мультивселенная Marvel, ответвление «Войн клонов», финал «Утиных историй» и, конечно, тот сериал, которым вам уже все уши прожужжали.

Смотрите также

Три мультфильма, три сериала и три фильма.

Фил Типпетт многое создал за свою невероятную карьеру, но «Безумный бог» ощущается его главным творением. Многолетняя история попыток реализовать замысел, сборы средств на «Кикстартере», комбинация любимых образов и тем — всё это помогает подобному восприятию «Безумного бога». Фильм выглядит как реликт из забытой эпохи, когда практические эффекты доминировали, а сюжеты позволяли себе быть мрачными, чудовищными и первобытно-жестокими. 2020-е годы не лучшая эпоха для гуро, и хотелось бы верить, что грандиозный в своём людоедском величии «Безумный бог» сможет немного оживить жанр.

Ужас от происходящего на экране перманентного кошмара перебивается восхищением, вызываемым невероятной кукольной анимацией. С учётом фантастичности сюжета Фил Типпетт мог бы создать более условную картину, где очевидная кукольность персонажей и объектов была бы вполне объяснимой — но нет, «Безумный бог» реален настолько, насколько реальны человеческие представления об Аде.

— Марина Беляева

О фильме

Многолетний труд Фила Типпетта наконец предстал в виде величественного, макабрического полнометражного фильма.

Комикс «Бэтмен: Долгий Хэллоуин» по праву считается одной из лучших историй о Тёмном рыцаре. Подкупает читателя и детективная интрига, и обилие запоминающихся сцен, и отлично воссозданная нуарная атмосфера города, погрязшего в преступности, и использование обширной галереи противников героя — в том числе обычных гангстеров.

Анимационная экранизация заметно отличается от первоисточника в плане картинки, которая стала менее гротескной и более кинематографичной, и рядом деталей. Студия Warner Bros. Animation, хотя и выпустила «Долгий Хэллоуин» в двух частях по полтора часа каждая, местами пошла на заметные упрощения истории. Но, несмотря на это, авторам удалось сохранить основные черты комикса Джефа Лоэба и Тима Сейла, благодаря которым он завоевал любовь читателей. Теперь в достаточно обширной подборке удачных экранных воплощений Бэтмена произошло очередное пополнение.

— Дмитрий Злотницкий

Задолго до похождений Геральта, Йеннифер и Цири неведомое лихо начинает убивать людей в лесах неподалёку от ведьмачьей цитадели Каэр Морхен. Расследовать нападения отправляется молодой ведьмак Весемир, любитель разудалых пьянок, красивых женщин и звонких монет.

«Кошмар волка» оставляет противоречивые впечатления. Если воспринимать мультфильм отдельно от вселенной «Ведьмака», то это чертовски пронзительная и трогательная история с красивой картинкой, захватывающими пейзажами и зрелищными боями. Пожалуй, разве что с кровищей создатели переборщили — её на экране хлещет гораздо больше, чем нужно для сюжета. Основная проблема «Кошмара волка», не позволившая ему подняться выше, в том, что сюжет переворачивает с ног на голову все наши представления о вселенной и выставляет ведьмаков не в самом лучшем свете.

— Алексей Ионов

О фильме

Разбираем, как фильм — если считать его каноном — полностью меняет восприятие франшизы.

«Энканто» продолжает моду поздних фильмов Disney на отказ от борьбы добра со злом и на решение внешнего конфликта через решение внутреннего. Не то чтобы антагониста не было вообще — никто не скажет, что тиранический матриарх семьи права, поколениями воспитывая невротиков. Но классические злодеи хотели власти, влияния и денег, а бабушка Мадригаль закрывает глаза на проблемы общины, подменяя настоящее благополучие его внешней копией. И справиться с таким антагонистом можно не через внешнее противостояние, а через диалог, в котором все стороны будут услышаны, сделают выводы и помирятся с самими собой и с теми, с кем конфликтовали.

Было бы поспешно называть такой подход более зрелым или глубоким, но он принципиально иной, чем обычно. Disney заслуживает уважения за попытку рассказать историю про волшебную семью через раскрытие внутреннего противостояния героев. Как и «Лука», «Энканто» позволяет зрителям сосредоточиться на действительно важных вещах, существующих не только на экране и лишь полтора часа, но и в реальной жизни. Ну и ещё фильм бессовестно красив и изобретателен, а композитор Лин-Мануэль Миранда официально стал Аланом Менкеном нового поколения.

— Марина Беляева

О фильме

Разбираем новый (юбилейный!) мультфильм Disney — смелую колумбийскую сказку о том, как сложно жить в гармонии с семьёй.

Полнометражное продолжение самого громкого аниме-сериала 2019 года не могло пройти незамеченным — «Бесконечный» стал лидером списка кассовых фильмов за всю историю Японии! Сжав формулу успеха до полутора часов и убрав лишнее, он даёт своему зрителю всё, чего тот просит: ещё больше зубодробительного экшена с постановкой и анимацией головокружительного уровня. Стихийные приёмы главных героев всё так же радуют глаз, а финальная битва просто захватывает дух. Разве что не все согласятся со стилистическим решением насчёт трехмерных щупалец.

В остальном новая арка «Клинка» остаётся верна себе: юмор о подсознании Иноске и Зеницу удачно разбавляет напускную серьёзность, а драма семьи Тандзиро дёргает за нужные душевные струны. Столп огня Ренгоку за своё короткое появление на экране успевает очаровать неподдельной харизмой и добротой, и потому последняя часть фильма действительно больно бьёт под дых. «Бесконечный» — чистокровный сёнэн с глупостями вроде самоисцеления силы воли, но удовольствия от этого он меньше никак не приносит.

— Олег Поторокин

О фильме

Что нужно знать перед просмотром нового фильма.

2021-й стал годом экспериментов для анимационных студий Disney. Никаких сиквелов, спин-оффов и традиционных сказочных сюжетов! Только оригинальные истории — такие, как «Райя», приключенческое роуд-муви в сеттинге фэнтезийной Юго-Восточной Азии.

Фильм не упускает случая нарушить правила. Молодая героиня не ищет себя, а учится доверять другим. Диалогам персонажи предпочитают схватки на мечах. Драконы — не огнедышащие машины смерти, но чуткие и даже немного игривые наставники. А главным злом выступает безликая чума — абстрактное воплощение раздоров, поглотивших мир людей.

Авторы показывают целую новую вселенную: века истории, пять самобытных культур, десятки обаятельных персонажей. Мир «Райи» настолько многообразен и пленителен, что в нём хочется остаться подольше — полутора часов точно не хватает! Хотелось бы верить, что эксперимент удался и Disney уже готовит сериал-продолжение.

— Илья Глазков

О фильме

Нам показывают прекрасный волшебный мир — но как же ему тесно в рамках одного фильма!

Полнометражное аниме года

Очень сложно рассматривать четвёртый ребилд Evangelion в отрыве от предыдущих трёх, потому что все они — единое целое. В народе у ребилдов неоднозначная репутация: оригинальный сериал и «Конец Евангелиона» якобы лучше, а фильмы сильно отошли от канона. Однако с выходом «3.0+1.01: Как-то раз» спорам пришел конец, а вместе с ними — всей франшизе.

В последней картине Хидэаки Анно расставил все точки над «i» и будто поиздевался над фанатами, которые много лет давили на него. Мир «Евангелиона» оказался цикличен, и каждая следующая итерация все сильнее отличается от предыдущей. И теперь этот бесконечный круг страданий и катастроф разорван… вроде бы. Ну и Синдзи наконец определился с девушкой и выбор сделал небанальный.

Пожалуй, главная прелесть четвёртого ребилда — огромный простор для трактовки заложенных в него смыслов. Фильм именно о них, а не о раскрытии персонажей и захватывающих событиях — всё это здесь тоже есть, просто в нетрадиционном формате. Кроме того, «3.0+1.01: Как-то раз» — невероятно красивое аниме, особенно первая его половина. Видно, на что потрачены все эти годы производства.

— Дмитрий Кинский

О фильме

К премьере четвёртой и последней картины объясняем, что такое эти «ребилды» и что сейчас происходит с Синдзи, Рэй и Аской.

Хидэаки Анно хочет, чтобы вы наконец забыли о «Евангелионе», а потому закрывает все гештальты.

О «Митчеллах против машин» первое время говорили лишь одно: это новый мультфильм, использующий стиль анимации «Человека-паука: Сквозь вселенные». Одного этого уже хватило бы для просмотра!

Но, помимо выдающейся визуальной части, авторы мастерски работают с классическими (если не сказать набившими оскомину) тропами историй про дисфункциональную семью, вписывая их в контекст сегодняшнего дня. Благодаря этому все обязательные сентиментальные моменты ощущаются по-настоящему искренними и способны пробить на эмоции.

«Митчеллы» — безумно креативное и изобретательное развлечение, где сценаристы не устают придумывать для героев всё новые безумные ситуации (чего стоит одна сцена с гигантскими Фёрби). Студия Sony Animation всю свою историю находилась в тени Pixar и DreamWorks, но после «Паука» и «Митчеллов против машин» совершила невероятный творческий прорыв. Теперь с большим интересом ждём их новые проекты.

— Павел Тютюнник

О фильме

Семейное постапокалиптическое роуд-муви с армией Фёрби, машинами и тюнингованными мопсами кажется одновременно старомодным и современным.

Вышедший в российский прокат в самом начале 2021-го новый мультфильм Pixar «Душа» стал своего рода инструкцией к всё такому же суетному и мрачному году. Болезни, трагедии, страшные новости и сезонный стресс запросто могут выбить землю из-под ног и лишить смысла жизни — и здесь приходят на помощь музыкант Джо Гарднер и его неугомонная спутница душа Двадцать Два.

Музыкальное путешествие и по миру загробному, и по миру реальному приводят героев и зрителей к мысли простой, но достаточно редко проговариваемой в других духоподъёмных мультфильмах студии — смысл жизни в том, чтобы его не искать. Не обязательно быть избранным. Не обязательно быть героем с предначертанной судьбой. Нет, можно быть просто музыкантом, учителем, отшельником, барбером, мятежной душой или даже кошкой — и быть счастливым. Не оправдывая чьих-то ожиданий. Просто быть собой и для себя.

— Александр Стрепетилов

О фильме

«Душа» — не просто один из лучших мультфильмов года, но и необычный творческий эксперимент. Разбираем, как Pixar нарушает свои собственные правила.

Мультфильм года

Многие писали про «Луку», что он недотягивает до стандарта мультфильмов Pixar. Да, «Лука» не пытается затрагивать глобальные темы человечности, жизни после смерти, психологии. В общем, он явно не в мейнстриме, заданном «Головоломкой» и «Душой».

Но именно это и делает его лучше.

Сейчас как будто стыдно обращаться к маленьким историям отдельных персонажей, да, необыкновенных, но всё же укладывающихся в представление о человеке. Лука и Альберто словно вышли из книжек Крапивина и Юза Алешковского, и приключения их того же рода, что у Тома Сойера, разве что с фантастическим допущением. Энрико Касароса показал редкую для современного кино, искреннюю и естественную мальчишескую дружбу.

Слово «душевный» избито, но оно очень подходит «Луке». Уже с первой короткометражки «Луна» Касароса обращался к образу родной Италии, а в «Луке» он разошёлся настолько, насколько позволял материал. Италия в «Луке» балансирует на грани приятных и необидных стереотипов и открывает нам уникальную страну, где цвета ярче, море глубже, а люди расслаблены, даже когда работают. Идеальный сеттинг для приключения на летних каникулах. Из такого места не хочется уходить не только героям, но и — в особенности — зрителям.

«Лука» цепляет незаметно, но результативно, не пытаясь претендовать на лавры лучшего фильма Pixar. Эта камерность и сдержанность кажется непривычной в эпоху большого эпоса и глобальных конфликтов; но хорошая история остаётся хорошей вне зависимости от размаха.

— Марина Беляева

О фильме

Тёплое авторское кино, сделанное талантливыми людьми с огромной любовью и не похожее ни на одну прошлую работу Pixar.

Список составлен на основе голосования авторов и редакции «Мира фантастики». В опросе приняли участие: Ксения Аташева, Дарья Беленкова, Марина Беляева, Денис Варков, Илья Глазков, Евгения Деревская, Светлана Евсюкова, Александра Злотницкая, Дмитрий Злотницкий, Алексей Ионов, Никита Казимиров, Рита Каруба, Дмитрий Кинский, Александр Киселев, Юрий Кулагин, Дарья Кулагина-Кравчук, Ангелина Лисицина, Леонид Мойжес, Денис Недыпич, Екатерина Никитина, Наталия Осояну, Евгений Пекло, Олег Поторокин, Кирилл Размыслович, Татьяна Рокси, Данил Ряснянский, Сергей Серебрянский, Денис Старостин, Александр Стрепетилов, Роман Файницкий, Игорь Хованский, Кирилл Шайдуров, Елена Щетинина

Иностранные новинки фантастики и фэнтези в 2022, которые выйдут в оригинале | Книги

За рубежом выйдет множество фантастических книг — интерес для нас они представляют как чисто умозрительный, в плане современных тенденций развития жанра, так и по причине того, что многие новинки рано или поздно появятся и на русском языке.

В наш топ вошли 10 книг, которые официально уже анонсированы зарубежными издателями. А также мы упомянули несколько книг, которые, возможно, выйдут в этом году. Или нет.

Смотрите также

В 2022 году ожидается множество книг самой разнообразной фантастики — особенно переводной.

В 2022 году выйдет немало книг, которые продолжают и завершают уже известные у нас циклы зарубежных писателей. Также отечественные издатели выпустят книги, которые только открывают разнообразные циклы.

Отдельные романы и сборники, а также молодежная фантастика.

А также мы упомянули несколько книг, которые, возможно, выйдут в этом году. Или нет.

Новый роман канадского писателя пересекается с предыдущей его книгой «Блеск минувших дней», чье действие разворачивалось в мире, напоминающем Италию эпохи Возрождения. Герои «Всех морей мира» связаны с корсарами и участвуют в многоходовой политической интриге, заставляющей вспомнить события из истории Венеции, крупнейшей морской державы средневековой Европы.

Юмористическая НФ, чей главный герой Джейми Грей занимается доставкой еды во время эпидемии COVID-19. В процессе он встречает друга детства Тома, который работает в организации по защите прав животных. Причём животных, которых нет на нашей Земле. Потому что в альтернативном измерении огромные монстры-кайдзю бродят по свободному от людей миру, и у них проблемы.

Финальный том цикла «Династия Одуванчиков», силкпанка, навеянного историей древнего Китая. В центре повествования — трое героев посреди двух войн. Персонажи разделены политикой, но соединены узами дружбы и любви. И даже сами боги не могут прозреть будущее, потому что судьбой смертных способны управлять только веления их сердец.

Финальный роман трилогии «Основатели», напоминающей знаменитый цикл автора «Божественные города». Вновь боги ведут войну, используя людей в качестве пешек. Начинавшие как авантюристы Сансия, Клеф и Беренис стали великими героями. Но чтобы одержать победу в войне, троице придется вспомнить воровскую юность и осуществить невероятное ограбление в сердце вражеской твердыни.

Поэтичная сказка от ведущего мастера интеллектуальных фантазий, которую он начал писать почти полвека назад, в 1975 году. Действие происходит в средневековой Ирландии, где лорд Хью О’Нил, Хранитель Севера, с помощью древнего обсидианового зеркала связывается с мифическими обитателями Зеленого острова, которые назначают его своим защитником.

Прославившаяся трилогией ориентального фэнтези «Опиумная война» Р.Ф. Куанг написала роман, который сравнивают с книгой Сюзанны Кларк «Джонатан Стрэндж и мистер Норрелл». В альтернативной Англии XIX века Королевский институт перевода Оксфорда, известный как Вавилон, стал центром магического могущества. Китайский мальчик, получивший имя Робин Свифт, поступает в Вавилон, работа в котором открывает ему дорогу к сокровенным и зачастую грязным тайнам империи…

Технотриллер от британского автора, известного своими парадоксальными романами в жанре НФ. Поначалу «Это» — фантастика ближнего прицела о новой социальной сети, буквально захватывающей человечество с помощью технологии виртуальной реальности. Как результат, мир людей попадает в тотальную зависимость от разумных машин, которые уже в более отдалённом будущем пытаются решить «человеческий вопрос» самым радикальным образом.

Начальный том нового цикла юношеской НФ от автора легендарной «Игры Эндера».

Подросток Лейз обладает невероятной способностью переключаться между сознаниями своих копий в параллельных мирах. Но однажды парень очнулся, обнаружив себя узником таинственной лаборатории на заброшенной постапокалиптической Земле, и понял, что он клон. Потому его дар больше не работает, и Лейзу придётся как-то с этим жить. Точнее, выживать…

Посмертный роман автора, чьё второе рождение случилось после переиздания в 2018 году АИ «Дракон не дремлет», когда писателя начали вовсю нахваливать, сравнивая с Мартином. Лучшие книги Форда — обычно историческое фэнтези, к которому относятся и долго лежавшие в архиве «Аспекты». Великое королевство переживает время перемен, когда парламент и волшебники решают избавиться от устаревшей монархии. Однако королевская семья не намерена сдаваться просто так…

НФ-триллер от мастера космической оперы, автора «Пространства Откровения». Врач и учёный Сайлас Коуд заботится о здоровье членов экспедиции, которые разыскивают по всей галактике таинственный артефакт. И постепенно в памяти Коуда возникают картины далёкого прошлого, когда он (или его воплощения?) участвовал в схожих событиях — на паруснике 1800-х годов у берегов Норвегии и в составе экипажа дирижабля, который в 1900-х исследовал ледяной каньон в Антарктиде. И у каждой экспедиции возникали аналогичные проблемы…

* * *

Среди интересных иностранных новинок 2022 года — также продолжения или финалы циклов Марка Лоуренса, Тэда Уильямса, Кристофера Руоккио, Тима Пауэрса, Ричарда Моргана, К. Дж. Паркера, Уолтера Йона Уильямса, Девин Мэдсон, Николаса Имса и множества других авторов.

Возможно?
Есть громкие новинки, чьи даты выхода не объявлены и поэтому могут быть перенесены. Главная — «Двери из камня», долгожданный финальный роман фэнтезийной трилогии Патрика Ротфусса «Хроника Убийцы короля». Есть шанс и на выход романа Скотта Линча «Шип Эмберлейна», четвертой книги о благородных канальях.

Может также появиться роман Сюзанны Кларк Cistern («Цистерна» или «Водоём») — о нем ничего не известно, кроме того, что это точно не продолжение «Джонатана Стренджа»; а также «Двенадцать месяцев» Джима Батчера — 18-й том приключений Гарри Дрездена; городское фэнтези Нила Геймана «Семь сестер»; космическая опера Чарльза Стросса «Призрачный двигатель» и роман Брендона Сандерсона «Потерянный металл», четвертая часть цикла «Бурерожденные».

Есть ещё несколько безымянных книг, чьи авторы допускают их появление в текущем году. Это вторая часть трилогии о Великих городах Н.К. Джемисин, начало нового цикла Шеннон Чакраборти, где мореход Синдбад столкнётся с крестоносцами, и старт нового цикла исторического фэнтези про Италию эпохи Возрождения от Паоло Бачигалупи, известного своей НФ.

А что же дедушка Мартин? Последний слух о «Ветрах зимы» обещает выход романа осенью 2023 года. Ну-ну, поглядим…

Тим Том Дэйв — Пивоваренная компания Magic City | Фотографии

{«photo_id»:378070839,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2021_08_05\/7be16a7321162e669638f4085d675861_200x200.jpg»,»photo_img_md»:»https:\/ \ /untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2021_08_05 \ /7be16a7321162e669638f4085d675861_640x640.jpg » «photo_img_lg»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2021_08_05 \ /7be16a7321162e669638f4085d675861_1280x1280.jpg»,» photo_img_og»:»https://\/untappd.akamaized. net\/photos\/2021_08_05\/7be16a7321162e669638f4085d675861_raw.jpg»},»created_at»:»Чт, 05 августа 2021 г., 06:15:12 +0000″,»checkin_id»:1061223820,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»magic- city-brewing-company-tim-tom-dave»,»beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Wheat Beer — American Pale Wheat»,»rating_score»:3,52 ,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{» brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\ /untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany. com»},»location»:{«brewery_city»:»Akron»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 3451628, «user_name»: «mddudecraftbrew», «first_name»: «Эрик», «last_name» «:»M»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/bb42bc424ad569b237b06b26e11d662d_100x100.jpg»,»is_private»:0},»место проведения»:[[]]}

{«photo_id»:304908203,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photo\/2020_07_15\/a81972e324c625ac100f840cf718ec4b_c_918051715_200x200.jpeg»,»photo_img_md»: \ /untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_15 \ /a81972e324c625ac100f840cf718ec4b_c_918051715_640x640.jpeg » «photo_img_lg»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_15 \ /a81972e324c625ac100f840cf718ec4b_c_918051715_1280x1280.jpeg»,» photo_img_og»:»https://untappd.akamaized.net\/photo\/2020_07_15\/a81972e324c625ac100f840cf718ec4b_c_918051715_raw.jpeg»},»created_at»:»Ср, 15 июля 2020 г., 21:19:35 +0000″,»checkin_id»:918051715,»beer» :3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв»,»beer_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3, «beer_ibu»:0,»beer_slug»:»волшебный-город-пивоваренная-компания-тим-том-дэйв»,»beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:» Пшеничное пиво — American Pale Wheat»,»rating_score»:3.52,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{ «brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/ \/untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»Соединенные Штаты»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https: \/\/www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Акрон»,»brewery_state»:»OH»,»lat»:41.0247,»lng»:-81.5485},»brewery_active»:1},»user»: {«uid»:1137220,»user_name»:»HankChianski»,»first_name»:»Hank»,»last_name»:»C»,»user_avatar»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/profile \/9f709b73fae623c8e9ad7961b1914c8a_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9091247,»venue_name»:»Magic City Brewing Company»,»venue_slug»:»magic-city-brewing-company» ,»primary_category»:»Ночная жизнь»,»parent_category_id»:»4d4b7105d754a06376d81259″,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»пивоварня»,»category_name»:»Пивоварня» ,»category_id»:»50327c8591d4c4b30a586d5d»,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»2727 Manchester Rd»,»venue_city»:»Акрон»,»venue_state»:»OH»,» лат»:41.0247,»lng»:-81.5485},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»http:\/\/www.magiccitybrewingcompany.com\/»},»foursquare»:{«foursquare_id «:»5d11140e3e8ac400233849c0″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/2x9AkYV»},»venue_icon»:{«sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos \/venue_9091247_c48c2950_bg_64.png»,»md»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_88.png»,»lg»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\ /venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_176. png?v=1″},»is_verified»:1}]}

{«photo_id»:304310281,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_12 \ /db93eda16518fbf3ccc793e809f3be5e_200x200.jpg » «photo_img_md»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_12 \ /db93eda16518fbf3ccc793e809f3be5e_640x640.jpg», «photo_img_lg»:» https: \ / \ / unappd.akamaized.net \ / photos \ / 2020_07_12 \ /db93eda16518fbf3be5e_1280e809f3be5e_1280x1280.jpg «,» photo_img_og «:» https: \ / \ / unsappd.akamaized.net \ / db93eda16518fbf3cecc793e809f3be5e_raw. jpg»},»created_at»:»Вс, 12 июля 2020 г., 01:06:55 +0000″,»checkin_id»:916885830,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»магический-город-пивоваренная компания-тим-том-дэйв», «beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139, «beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»Соединенные Штаты»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Акрон»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 7379910, «user_name»: «Zspeer15», «first_name»: «Zack», «last_name» «:»S»,»user_avatar»:»https:\/\/gravatar.com\/avatar\/7860f8d36475b403a6627f7991195f0e?size=100&d=https%3A%2F%2Funtappd.akamaized.net%2Fsite%2Fassets%2Fimages%2Fdefault_avatar_v3_gravatar.jpg%3Fv%3D2″,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9091247,»venue_name»:»Magic City Brewing Company»,» площадка_slug»:»волшебная-городская-пивоваренная компания»,»primary_category»:»Ночная жизнь»,»parent_category_id»:»4d4b7105d754a06376d81259″,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key» :»пивоварня»,»category_name»:»Пивоварня»,»category_id»:»50327c8591d4c4b30a586d5d»,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»2727 Manchester Rd»,»venue_city»:» Акрон»,»venue_state»:»OH»,»lat»:41. 0247,»lng»:-81.5485},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»http:\/\/www.magiccitybrewingcompany.com\/»},»foursquare»:{«foursquare_id «:»5d11140e3e8ac400233849c0″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/2x9AkYV»},»venue_icon»:{«sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos \/venue_9091247_c48c2950_bg_64.png»,»md»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_88.png»,»lg»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\ /venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_176.png?v=1″},»is_verified»:1}]}

{«photo_id»:303088802,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_05 \ /c32441827b6a8fa0a75ba976f2d73d18_200x200.jpg » «photo_img_md»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_05 \ /c32441827b6a8fa0a75ba976f2d73d18_640x640.jpg», «photo_img_lg»:» https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_05 \ /c32441827b6a8fa0a75ba976f2d73d18_1280x1280.jpg » «photo_img_og»:» https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фотографии \ / 2020_07_05 \ / c32441827b6a8fa0a75ba976f2d73d18_raw. jpg»},»created_at»:»Вс, 05 июля 2020 г., 17:10:54 +0000″,»checkin_id»:914466237,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»магический-город-пивоваренная компания-тим-том-дэйв», «beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139, «beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»Соединенные Штаты»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany. com»},»location»:{«brewery_city»:»Акрон»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 1245559, «user_name»: «HSQUARED811», «first_name»: «Holly», «last_name» «:»H»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/879aaa5a750d31bcbd795b2a179cfd0d_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9917985,»venue_name»:»Untappd дома»,»venue_slug»:»untappd-at-home»,»primary_category»:»Резиденция «,»parent_category_id»:»4e67e38e036454776db1fb3a»,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»home_private»,»category_name»:»Домашняя (частная)»,»category_id»: «4bf58dd8d48988d103941735″,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»»,»venue_city»:»»,»venue_state»:»везде»,»широта»:34.2347,»lng»: -77.9482},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»»},»foursquare»:{«foursquare_id»:»5e7b4d99c91df60008e8b168″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/3bDWYuq»},»venue_icon»:{«sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9917985_b3a5d245_bg_64. png»,»md»:»https:\/\/untappd .akamaized.net\/venuelogos\/venue_9917985_b3a5d245_bg_88.png»,»lg»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9917985_b3a5d245_bg_176.png?v=1″},»is_verified»:1 }]}

{«photo_id»:302640509,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_07_04\/4e9c14ceb81f895b29ac215e5ec110c0_200x200.jpg»,»photo_img_md»:»https:\/ \/unappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_04 \ /4e9c14ceb81f895b29ac215e5ec110c0_640x640.jpg » «photo_img_lg»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_04 \ /4e9c14ceb81f895b29ac215e5ec110c0_1280x1280.jpg», «photo_img_og»:» https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_07_04\/4e9c14ceb81f895b29ac215e5ec110c0_raw.jpg»},»created_at»:»Сб, 04 июля 2020 г. 00:52:10 +0000″,»checkin_id»:913572110, «beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв»,»beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/сайт\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»пивоваренная компания-волшебный город-тим-том-дэйв»,»beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id «:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had» :false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company «,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Akron»,»brewery_state»:»OH», «lat»:41.0247,»lng»:-81.5485},»brewery_active»:1},»user»:{«uid»:4001888,»user_name»:»Bigpolelock»,»first_name»:»mark»,»last_name «:»»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/59ecb8b2d5a79968fd5a1852a36eaee5_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9091247,»venue_name»:»Magic City Brewing Company»,»venue_slug»:»magic-city-brewing-company»,»primary_category» :»Ночное заведение»,»parent_category_id»:»4d4b7105d754a06376d81259″,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»пивоварня»,»category_name»:»Пивоварня»,»category_id» :»50327c8591d4c4b30a586d5d»,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»2727 Manchester Rd»,»venue_city»:»Акрон»,»venue_state»:»OH»,»lat»:41.0247 ,»lng»:-81.5485},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»http:\/\/www. magiccitybrewingcompany.com\/»},»foursquare»:{«foursquare_id»:»5d11140e3e8ac400233849c0″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/2x9AkYV»},»venue_icon»:{«sm»: «https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_64.png»,»md»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_88.png»,»lg «:»https://untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_176.png?v=1″},»is_verified»:1}]}

{«photo_id»:302350887,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_03 \ /6c306530a540d2f984e49b173abfdb02_200x200.jpg » «photo_img_md»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_07_03 \ /6c306530a540d2f984e49b173abfdb02_640x640.jpg», «photo_img_lg»:» https: \ / \ / intappd.akamaized.net \ / photos \ / 2020_07_03 \ /6c306530a540d2f984e49b173abfdb02_128b173abfdb02_128b173abfdb02_1280x1280.jpg «,» hto.gimg_og «:» https: \ / \ / usnappd.akamaized.net \ / photos \ / 2020_07_03 \ / 6c306530a540d2f984e49b173abfdb02_raw. jpg»},»created_at»:»Пт, 03 июля 2020 г. 00:34:51 +0000″,»checkin_id»:912988483,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»магический-город-пивоваренная компания-тим-том-дэйв», «beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139, «beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Акрон»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41. 0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 1128423, «user_name»: «Blondie12», «first_name»: «Шейла», «last_name» «:»»,»user_avatar»:»https://gravatar.com\/\/avatar\/a0d0b60c019a90d6619845804e9
?size=100&d=https%3A%2F%2Funtappd.akamaized.net%2Fsite%2Fassets%2Fimages%2Fdefault_avatar_v3_gravatar.jpg%3Fv%3D2″,»is_private»:0},»место проведения»:[[]]}

{«photo_id»:302166287,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_07_01\/2298aa87306b26c5cae86f37f510f0e4_200x200.jpg»,»photo_img_md»:»https:\/ \ / tuntappd.akamaized.net \ / photos \ / 2020_07_01 \ /2298aa87306b26c5cae86f37f510f0e86f37f510f0e4_640x640.jpg «,» photo_img_lg «:» HTTPS: \ / \ / unsappd.akamaized.net \ / 2298AA87306B26C5CAE86F37F510F0E4_1280x1280.jpg»,»photo_img_og»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_07_01\/2298aa87306b26c5cae86f37f510f0e4_raw.jpg»},»created_at»:»Ср, 01 июля 2020 23:29:55 +0000 «,»checkin_id»:912616286,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв»,»beer_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/site\/ пиво_логос\/пиво-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»волшебный-город-пивоваренная компания-тим-том-дэйв»,»beer_description»:»»,» is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское светлое пшеничное»,»rating_score»:3.52,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{ «brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/ \/untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»Соединенные Штаты»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https: \/\/www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Акрон»,»brewery_state»:»OH»,»lat»:41.0247,»lng»:-81.5485},»brewery_active»:1},»user»: {«uid»:13866,»user_name»:»peacemonger22″,»first_name»:»Dave»,»last_name»:»H»,»user_avatar»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/profile \/b4404f2a6bc689560c76715cba94c14f_thumb.jpg»,»is_private»:0},»место проведения»:[[]]}

{«photo_id»:301775662,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_28\/7f12bc016a16b4fbe1f96438845505b4_200x200.jpg»,»photo_img_md»:»https:\/ \/unappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_28 \ /7f12bc016a16b4fbe1f96438845505b4_640x640.jpg » «photo_img_lg»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_28 \ /7f12bc016a16b4fbe1f96438845505b4_1280x1280.jpg», «photo_img_og»:» https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_28\/7f12bc016a16b4fbe1f96438845505b4_raw.jpg»},»created_at»:»Вс, 28 июня 2020 г., 20:33:50 +0000″,»checkin_id»:911816245, «beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв»,»beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/сайт\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»пивоваренная компания-волшебный город-тим-том-дэйв»,»beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id «:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had» :false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company «,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Akron»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 2847729, «user_name»: «Линни», «first_name»: «Линн», «last_name» «:»S»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/5748b32c050f1622f75faa027da1970b_100x100.jpeg»,»is_private»:0},»место проведения»:[[]]}

{«photo_id»:301752510,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_28\/c9d439e6651f48ed43ddaf99c43c0d0a_200x200.jpg»,»photo_img_md»:»https:\/ \ /untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_28 \ /c9d439e6651f48ed43ddaf99c43c0d0a_640x640.jpg » «photo_img_lg»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_28 \ /c9d439e6651f48ed43ddaf99c43c0d0a_1280x1280.jpg»,» photo_img_og»:»https://\/untappd. akamaized.net\/photos\/2020_06_28\/c9d439e6651f48ed43ddaf99c43c0d0a_raw.jpg»},»created_at»:»Вс, 28 июня 2020 г., 19:15:29 +0000″,»checkin_id»:911770127,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»magic- city-brewing-company-tim-tom-dave»,»beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Wheat Beer — American Pale Wheat»,»rating_score»:3,52 ,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{» brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\ /untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany. com»},»location»:{«brewery_city»:»Akron»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 4056128, «user_name»: «sarafina63», «first_name»: «Бекки», «last_name» «:»K»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/2e4780079cae52cf281eb13b19ae20f4_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9091247,»venue_name»:»Magic City Brewing Company»,»venue_slug»:»magic-city-brewing-company»,»primary_category» :»Ночное заведение»,»parent_category_id»:»4d4b7105d754a06376d81259″,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»пивоварня»,»category_name»:»Пивоварня»,»category_id» :»50327c8591d4c4b30a586d5d»,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»2727 Manchester Rd»,»venue_city»:»Акрон»,»venue_state»:»OH»,»lat»:41.0247 ,»lng»:-81.5485},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»http:\/\/www.magiccitybrewingcompany.com\/»},»foursquare»:{«foursquare_id»:»5d11140e3e8ac400233849c0″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/2x9AkYV»},»venue_icon»:{«sm»: «https:\/\/untappd. akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_64.png»,»md»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_88.png»,»lg «:»https://untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_176.png?v=1″},»is_verified»:1}]}

{«photo_id»:301748181,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_28 \ /87963509c1348a710f5b7cb6c1123dd0_200x200.jpeg » «photo_img_md»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_28 \ /87963509c1348a710f5b7cb6c1123dd0_640x640.jpeg», «photo_img_lg»:» https: \ / \ / unappd.akamaized.net \ / photos \ / 2020_06_28 \ /87963509C1348A710f5b7cb6c1123dd0b7c80x1280hdd0_1280x1280.jpeg «,» photo_img_og «:» https: \ / \ / usnappd.akamaized.net \ / 87963509c1348a710f5b7cb6c1123dd0_raw. jpeg»},»created_at»:»Вс, 28 июня 2020 г., 19:00:48 +0000″,»checkin_id»:911761818,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm. jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»магический-город-пивоваренная компания-тим-том-дэйв», «beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139, «beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Akron»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 7607620, «user_name»: «Hawk72», «first_name»: «Chris», «last_name» «:»H»,»user_avatar»:»https://\/untappd. akamaized.net\/profile\/ec65b4e3033316256fe8aa45d09e508f_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9091247,»venue_name»:»Magic City Brewing Company»,»venue_slug»:»magic-city-brewing-company»,»primary_category» :»Ночное заведение»,»parent_category_id»:»4d4b7105d754a06376d81259″,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»пивоварня»,»category_name»:»Пивоварня»,»category_id» :»50327c8591d4c4b30a586d5d»,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»2727 Manchester Rd»,»venue_city»:»Акрон»,»venue_state»:»OH»,»lat»:41.0247 ,»lng»:-81.5485},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»http:\/\/www.magiccitybrewingcompany.com\/»},»foursquare»:{«foursquare_id»:»5d11140e3e8ac400233849c0″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/2x9AkYV»},»venue_icon»:{«sm»: «https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_64.png»,»md»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_88.png»,»lg «:»https://untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_176. png?v=1″},»is_verified»:1}]}

{«photo_id»:300982544,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_25 \ /a9193d2985a35102bc669b5dd5b6c9ac_200x200.jpeg » «photo_img_md»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_25 \ /a9193d2985a35102bc669b5dd5b6c9ac_640x640.jpeg», «photo_img_lg»:» https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_25 \ /a9193d2985a35102bc669b5dd5b6c9ac_1280x1280.jpeg » «photo_img_og»:» https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фотографии \ / 2020_06_25 \ / a9193d2985a35102bc669b5dd5b6c9ac_raw. jpeg»},»created_at»:»Чт, 25 июня 2020 г., 21:22:45 +0000″,»checkin_id»:910250263,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»магический-город-пивоваренная компания-тим-том-дэйв», «beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139, «beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»Соединенные Штаты»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Акрон»,»brewery_state»:»OH», «lat»:41.0247,»lng»:-81.5485},»brewery_active»:1},»user»:{«uid»:3029502,»user_name»:»Sculpin555″,»first_name»:»Rick»,»last_name «:»S»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/9e48ec71e189caa798656ece9a10d644_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9801799,»venue_name»:»Growler Garage Tavern»,»venue_slug»:»growler-garage-tavern»,»primary_category»:»Ночная жизнь Spot»,»parent_category_id»:»4d4b7105d754a06376d81259″,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»sports_bar»,»category_name»:»Sports Bar»,»category_id»:» 4bf58dd8d48988d11d941735″,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»Доктор Сара Берн, 105″,»venue_city»:»Tallmadge»,»venue_state»:»OH»,»lat»:41.0973, «lng»:-81. 4288},»контакт»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»»},»foursquare»:{«foursquare_id»:»5e35b5595480e80008526d37″,»foursquare_url»:»https:\/ \/4 кв.com\/31f6CQp»},»venue_icon»:{«sm»:»https:\/\/ss3.4sqi.net\/img\/categories_v2\/nightlife\/sportsbar_bg_64.png»,»md»:»https :\/\/ss3.4sqi.net\/img\/categories_v2\/nightlife\/sportsbar_bg_88.png»,»lg»:»https:\/\/ss3.4sqi.net\/img\/categories_v2\/ ночная жизнь\/sportsbar_bg_512.png»},»is_verified»:0}]}

{«photo_id»:298962257,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_14\/84af7478a4f211786d688458c5a6afae_200x200.jpg»,»photo_img_md»:»https:\/ \/untappd.akamaized.нетто \ / фото \ / 2020_06_14 \ /84af7478a4f211786d688458c5a6afae_640x640.jpg » «photo_img_lg»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_14 \ /84af7478a4f211786d688458c5a6afae_1280x1280.jpg», «photo_img_og»:» https: \/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_14\/84af7478a4f211786d688458c5a6afae_raw.jpg»},»created_at»:»Вс, 14 июня 2020 г., 00:56:04 +0000″,»checkin_id»:4242,»beer «:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв»,»beer_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/сайт\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»пивоваренная компания-волшебный город-тим-том-дэйв»,»beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id «:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had» :false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company «,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Akron»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 546988, «user_name»: «TimmyWebs», «first_name»: «Tim», «last_name» «:»W»,»user_avatar»:»https://\/untappd. akamaized.net\/profile\/d5e407df75ba25cdb4c8848db4975a4b_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9917985,»venue_name»:»Untappd дома»,»venue_slug»:»untappd-at-home»,»primary_category»:»Резиденция «,»parent_category_id»:»4e67e38e036454776db1fb3a»,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»home_private»,»category_name»:»Домашняя (частная)»,»category_id»: «4bf58dd8d48988d103941735″,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»»,»venue_city»:»»,»venue_state»:»везде»,»широта»:34.2347,»lng»: -77.9482},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»»},»foursquare»:{«foursquare_id»:»5e7b4d99c91df60008e8b168″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/3bDWYuq»},»venue_icon»:{«sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9917985_b3a5d245_bg_64.png»,»md»:»https:\/\/untappd .akamaized.net\/venuelogos\/venue_9917985_b3a5d245_bg_88.png»,»lg»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9917985_b3a5d245_bg_176.png?v=1″},»is_verified»:1 }]}

{«photo_id»:298650048,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/photos\/2020_06_13\/573f8f3b793fd03c870f5cc15f8e55f3_200x200.jpeg»,»photo_img_md»:»https:\/ \/unappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_13 \ /573f8f3b793fd03c870f5cc15f8e55f3_640x640.jpeg » «photo_img_lg»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_13 \ /573f8f3b793fd03c870f5cc15f8e55f3_1280x1280.jpeg», «photo_img_og»:» https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_13\/573f8f3b793fd03c870f5cc15f8e55f3_raw.jpeg»},»created_at»:»Сб, 13 июня 2020 г. 03:38:03 +0000″,»checkin_id»:3822, «beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв»,»beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/сайт\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»пивоваренная компания-волшебный город-тим-том-дэйв»,»beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id «:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had» :false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company «,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Akron»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 2385805, «user_name»: «SPLevis», «first_name»: «Shaun», «last_name» «:»L»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/11a13cf4a81e4d8ee1e969e17710e6f3_100x100.jpg»,»is_private»:0},»место проведения»:[[]]}

{«photo_id»:298648031,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_13\/d82e5d3fc812fbaf24031fca2943c987_200x200.jpg»,»photo_img_md»:»https:\/ \ /untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_13 \ /d82e5d3fc812fbaf24031fca2943c987_640x640.jpg » «photo_img_lg»: «https: \ / \ / untappd.akamaized.net \ / фото \ / 2020_06_13 \ /d82e5d3fc812fbaf24031fca2943c987_1280x1280.jpg»,» photo_img_og»:»https://\/untappd. akamaized.net\/photos\/2020_06_13\/d82e5d3fc812fbaf24031fca2943c987_raw.jpg»},»created_at»:»Сб, 13 июня 2020 г., 03:22:28 +0000″,»checkin_id»:
9179,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»magic- city-brewing-company-tim-tom-dave»,»beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Wheat Beer — American Pale Wheat»,»rating_score»:3,52 ,»rating_count»:139,»count»:139,»beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{» brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\ /untappd.akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»Соединенные Штаты»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany. com»},»location»:{«brewery_city»:»Акрон»,»brewery_state»:»OH», «lat»: 41.0247, «lng»: -81.5485}, «brewery_active»: 1}, «user»: {«uid»: 4086091, «user_name»: «jkemmer2», «first_name»: «Дженни», «last_name» «:»R»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/13343b3fcb4abe484b7f306ebd56cb80_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9091247,»venue_name»:»Magic City Brewing Company»,»venue_slug»:»magic-city-brewing-company»,»primary_category» :»Ночное заведение»,»parent_category_id»:»4d4b7105d754a06376d81259″,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»пивоварня»,»category_name»:»Пивоварня»,»category_id» :»50327c8591d4c4b30a586d5d»,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»2727 Manchester Rd»,»venue_city»:»Акрон»,»venue_state»:»OH»,»lat»:41.0247 ,»lng»:-81.5485},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»http:\/\/www.magiccitybrewingcompany.com\/»},»foursquare»:{«foursquare_id»:»5d11140e3e8ac400233849c0″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/2x9AkYV»},»venue_icon»:{«sm»: «https:\/\/untappd. akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_64.png»,»md»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_88.png»,»lg «:»https://untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_176.png?v=1″},»is_verified»:1}]}

{«photo_id»:298608853,»photo»:{«photo_img_sm»:»https:\/\/untappd.akamaized.net \ / photos \ / 2020_06_13 \ /0ab6b7040eced4d65f969e3103f0efdb_200x200.jpg «,» photo_img_md «:» https: \ / \ / unsappd.akamaized.net \ //0ab6b70406_13 \ /0ab6b70403f0efdb_640x640.jpg «,» photo_img_lg «:» https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_13\/0ab6b7040eced4d65f969e3103f0efdb_1280x1280.jpg»,»photo_img_og»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/photos\/2020_06_13\/0ab6b7040feed jpg»},»created_at»:»Сб, 13 июня 2020 г., 00:26:47 +0000″,»checkin_id»:
6168,»beer»:{«bid»:3384845,»beer_name»:»Тим Том Дэйв», «beer_label»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/site\/beer_logos\/beer-3384845_f4a1b_sm.jpeg»,»beer_abv»:5.3,»beer_ibu»:0,»beer_slug»:»магический-город-пивоваренная компания-тим-том-дэйв», «beer_description»:»»,»is_in_production»:1,»beer_style_id»:5,»beer_style»:»Пшеничное пиво — Американское бледное пшеничное»,»rating_score»:3,52,»rating_count»:139,»count»:139, «beer_active»:1,»on_list»:false,»has_had»:false,»auth_rating»:0,»wish_list»:false},»пивоварня»:{«brewery_id»:348309,»brewery_name»:»Magic City Brewing Company»,»brewery_slug»:»magic-city-brewing-company»,»brewery_page_url»:»\/MagicCityBrewingCo»,»brewery_label»:»https:\/\/untappd. akamaized.net\/сайт\/brewery_logos\/brewery-348309_70292.jpeg»,»название_страны»:»США»,»контакт»:{«твиттер»:»»,»facebook»:»https:\/\/ www.facebook.com\/MagicCityBrewingCo\/»,»url»:»http:\/\/magiccitybrewingcompany.com»},»location»:{«brewery_city»:»Akron»,»brewery_state»:»OH», «lat»:41.0247,»lng»:-81.5485},»brewery_active»:1},»user»:{«uid»:4215539,»user_name»:»Ниданян»,»first_name»:»Кевин»,»last_name «:»M»,»user_avatar»:»https://\/untappd.akamaized.net\/profile\/d1181a95a4b8782e67085d1eed5cbc24_100x100.jpg»,»is_private»:0},»venue»:[{«venue_id»:9091247,»venue_name»:»Magic City Brewing Company»,»venue_slug»:»magic-city-brewing-company»,»primary_category» :»Ночное заведение»,»parent_category_id»:»4d4b7105d754a06376d81259″,»categories»:{«count»:1,»items»:[{«category_key»:»пивоварня»,»category_name»:»Пивоварня»,»category_id» :»50327c8591d4c4b30a586d5d»,»is_primary»:true}]},»location»:{«venue_address»:»2727 Manchester Rd»,»venue_city»:»Акрон»,»venue_state»:»OH»,»lat»:41.0247 ,»lng»:-81.5485},»contact»:{«twitter»:»»,»venue_url»:»http:\/\/www. magiccitybrewingcompany.com\/»},»foursquare»:{«foursquare_id»:»5d11140e3e8ac400233849c0″,»foursquare_url»:»https:\/\/4sq.com\/2x9AkYV»},»venue_icon»:{«sm»: «https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_64.png»,»md»:»https:\/\/untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_88.png»,»lg «:»https://untappd.akamaized.net\/venuelogos\/venue_9091247_c48c2950_bg_176.png?v=1″},»is_verified»:1}]}

Американская комедия в черно-белом: Рейд, Тим, Дризен, Том, Рапопорт, Рон: 9780226709000: Amazon.com: Books

Том Дризен — один из самых новаторских, уважаемых и любимых комиков и артистов в мире. Он покинул свой родной город Харви, штат Иллинойс, более 40 лет назад в поисках славы и богатства в Голливуде. С тех пор он более 500 раз появлялся на национальном телевидении в качестве стендап-комика, в том числе 61 раз на Tonight Show. Он также был любимым гостем Дэвида Леттермана и даже вел шоу во время его отсутствия.

В течение многих лет он был завсегдатаем всех главных выставочных залов Лас-Вегаса, выступая с легендами, включая Сэмми Дэвиса-младшего. , Лайза Миннелли, Натали Коул, Смоки Робинсон и многие другие. В течение 14 лет он гастролировал по Соединенным Штатам на разогреве у Фрэнка Синатры, которого он знал как наставника и друга.

Как актер, Том снялся во многих фильмах, включая «Проблемы с кривой», «Космические шары», «Человек на Луне» и в фильмах HBO «Крысиная стая» и «Лански». Он также освоил роли в классических телевизионных шоу, включая «Коломбо», «Прикосновение ангела», «Она написала убийство», «Факты из жизни» и «WKRP в Цинциннати».Он записал комедийный альбом под названием «Сумасшедший белый мальчик», став единственным белым комиком, записавшим альбом перед полностью черной аудиторией.

В настоящее время Том появляется в театрах по всей стране в своем моноспектакле «Вечер смеха» и «Истории Синатры», демонстрируя свои признанные критиками комедийные способности и необыкновенные способности рассказчика. Сочетание этих двух факторов привело к тому, что критик Chicago Tribune Рик Коган написал: «Блестяще, смешно, остро». В свободное время Том пользуется постоянным спросом в качестве хедлайнера и церемониймейстера на корпоративных мероприятиях, а также снимается с артистами от Bon Jovi до Элтона Джона.

Первые шесть лет своей карьеры Том делил сцену с Тимом Ридом в качестве первой в Америке черно-белой комедийной команды. Дуэт недавно написал книгу под названием «Тим и Том — американская комедия в черно-белом» о своем путешествии по стране с 1969 по 1975 год, которая сейчас разрабатывается как кинофильм.

Том также оставил неизгладимый след за десятилетия своей благотворительной деятельности, предоставив свой талант более чем 100 благотворительным организациям и став основателем одной из своих собственных: «День Дарлин» в пользу исследований рассеянного склероза в честь его покойной сестры.

Гордый ветеран ВМС США и решительный сторонник американских войск, он выступал на военных базах по всему миру, включая Ирак. 14 мая 2005 года он получил престижную награду «Почетная медаль острова Эллис» за гуманитарную службу своей стране.

Когда Том не гастролирует, он живет в Лос-Анджелесе, Калифорния.

Картирование белковых взаимодействий в активном суперкомплексе TOM-TIM23

Рост дрожжей и обращение с ними

Штаммы дрожжей выращивали в среде YP (1% дрожжевого экстракта, 2% пептона), содержащей 2% глюкозы (YPD) или 3% глицерина (YPG). ) как источник углерода.YPh599 (MATa ade2-101, his3- ∆ 200, leu2-∆1, ura3-52, trp1-∆63, lys2- 801, ATCC ^® 204679™), BY4741 (MATa 5) leu2∆0, met15∆0, ura3∆0 , Euroscarf) и ^HisS* Tim23 ⁴¹ выращивали при 30 °C при встряхивании. Полный список штаммов дрожжей, созданных в этом исследовании, представлен в дополнительной таблице 2. Jac1 ^sfGFP экспрессировался в клетках BY4741. Для этого Jac1 ^sfGFP клонировали в p425Gal1 под индуцируемым галактозным промотором.Полученную плазмиду (pRG13) трансформировали в BY4741 и трансформанты отбирали на SSuc-Leu (селективная сахарозная среда без лейцина). Для экспрессии субъединиц транслоказы с меткой ALFA была сконструирована пустая плазмида с меткой ALFA и терминатором ALDH в pRS414 (pRG26). Впоследствии различные субъединицы транслоказы с промоторной областью выше примерно 500 п.н. были клонированы 5′ метки ALFA, что привело к созданию плазмид, как указано в дополнительной таблице 3. После этого плазмиды были преобразованы в YPh599, а трансформанты были отобраны на SD -Trp (селективная глюкозная среда без триптофана).Кроме того, WT Tim21 в плазмиде pFL39 трансформировали в штамм Tim21 ^FLAG и отбирали на SD-Trp. Для мутантов Tim23 Cysteine Mutrants, TIM23 Shuftling Striend MB29 ( MAT A ADE 2 HY3 a ADE2 HY3 LEU2 URA3 TRP1 LYS2 TIM23 :: Lys2 [ YCPlac33 — TIM23 ]) был сгенерирован ⁴⁵, в котором LYS2 Кассета заменила эндогенную TIM23 на . Это осуществляли на штамме, содержащем плазмиду, экспрессирующую TIM23 с URA3 в качестве маркера.Ген TIM23 и 1 т. п.н. выше и ниже гена были клонированы в pRS413 (маркер HIS3), а точечные мутации были введены с использованием сайт-направленного мутагенеза (дополнительная таблица 3). Эти плазмиды трансформировали в перетасовочный штамм, после чего проводили селекцию против Ura3, содержащих плазмиды дикого типа TIM23 , содержащие 5-фтороротовую кислоту (5-FOA). Эти клетки выращивали на YPD и YPG при 30 °C для получения митохондрий.

Выделение митохондрий

Дифференциальное центрифугирование дрожжевых экстрактов проводили для выделения митохондрий ⁵⁹ .Вкратце, штаммы дрожжей культивировали в соответствующих средах при 30°C до OD ₆₀₀ 1,5–2,5 и собирали. Осадок промывали водой, после чего обрабатывали в буфере ДТТ (10 мМ ДТТ, 100 мМ Трис/HCl, рН 9,4) в течение 30 мин при 30°С при встряхивании. Затем клетки промывали и обрабатывали буфером для зимолиазы (20 мМ KPO ₄, рН 7,4, 1,2 М сорбита и 0,57 мг/л зимолиазы) в течение 1 ч при 30°С при встряхивании. Клетки собирали. Осадок ресуспендировали в холодном буфере для гомогенизации (600 мМ сорбита, 10 мМ Трис/HCl, pH 7.4, 1 мкг/л BSA, 1 мМ PMSF и 1 мМ ЭДТА), и клетки гомогенизировали с использованием гомогенизатора. Для получения митохондрий проводили дифференциальное центрифугирование. Затем их ресуспендировали в буфере SEM (250 мМ сахарозы, 20 мМ MOPS/KOH, pH 7,2, 1 мМ ЭДТА). После оценки концентрации белка с помощью анализа Бредфорда их делили на аликвоты в соответствующем объеме, мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С.

Экспрессия Superfolder-GFP, иммунофлуоресцентное окрашивание и STED-наноскопия дрожжевых клеток .На следующий день клетки индуцировали 2% галактозой в течение 1 часа. Затем к культуре добавляли 0,5 мкМ MitoTracker
^TM Orange CTMRos (Thermo Fisher Scientific, Массачусетс, США). Клетки встряхивали в течение 20 мин. После этого клетки собирали, один раз промывали средой и анализировали с помощью флуоресцентного микроскопа DeltaVision (GE Healthcare, IL, USA).

Для конфокальной и STED-микроскопии дрожжевые клетки, содержащие плазмиду pRG13, выращивали в среде, содержащей 2% глюкозы в качестве единственного источника углерода.Экспрессию sfGFP индуцировали добавлением в среду 2% галактозы. Через час после индукции клетки, выросшие до фазы раннего экспоненциального роста (OD ₆₀₀ = 0,4–0,7), фиксировали формальдегидом и дополнительно обрабатывали, как описано ранее ⁶⁰ . Детекцию специфических эпитопов осуществляли путем инкубации клеток с антисыворотками, специфичными к GFP (Anti-GFP [3E6], Mouse, Thermo Fisher Scientific, кат. № A11120, номер партии 1859591), Tom40 и Tim23 соответственно (4 °C, 16 ч).Первичные антитела выявляли с использованием вторичных антител, специально помеченных Abberior STAR RED (Abberior, Геттинген, Германия) или Alexa Fluor 594 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) (RT, 90 мин).

STED-наноскопия была достигнута с использованием четырехъядерного сканирующего STED-микроскопа с длиной волны 775 нм (Abberior Instruments, Геттинген, Германия). Микроскоп был оснащен объективом UPlanSApo 100×/1,40 Oil (Olympus, Токио, Япония) и возбуждающими лазерами с длиной волны 561 нм (возбуждение Alexa Fluor 594) и 640 нм (возбуждение STAR RED) соответственно.Был применен размер пикселя 15 нм, и кроме растяжения контраста никакая дополнительная обработка изображения не применялась.

Экспрессия и очистка белков

Для экспрессии рекомбинантных белков в E. coli плазмиды трансформировали в компетентные клетки BL21. Для экспрессии нанотел Jac1 ^sfGFP и GFP клетки предварительно культивировали в среде с LB-антибиотиками в течение ночи при 37 °C. После этого клетки разбавляли до OD ₆₀₀ 0,1. При достижении ОД ₆₀₀ из 0.6, экспрессию белка индуцировали обработкой 1 мМ IPTG в течение 4 часов при встряхивании при 37 °C для Jac1 ^sfGFP и при 30 °C для нанотела GFP. Клетки собирали. Осадок бактериальных клеток лизировали, после чего супернатант наносили на соответствующие аффинные колонки. Для Jac1 ^sfGFP, который имеет метку 6X His, за которой следует сайт расщепления протеазой Sumo на N-конце, использовали колонки HisTrap (GE Healthcare). Очистку проводили с использованием ÄKTA Purifier 10 (GE Healthcare).Вкратце, отфильтрованный супернатант, полученный после лизиса, наносили на колонку HisTrap, предварительно уравновешенную буфером HisTrap A (40 мМ Трис/HCl, pH 7,4, 500 мМ NaCl, 10 мМ имидазол). После загрузки колонку промывали буфером HisTrap A и элюировали линейным градиентом буфера HisTrap B (40 мМ Трис/HCl, pH 7,4, 500 мМ NaCl, 500 мМ имидазол). Фракции собирали и анализировали с помощью SDS-PAGE с последующим окрашиванием кумасси бриллиантовым синим. Фракции, содержащие представляющий интерес белок, объединяли.Диализ проводили в течение ночи в буфере для диализа (20 мМ Трис/HCl, pH 7,4, 100 мМ NaCl). После диализа белковый раствор концентрировали на центрифужных фильтрах Amicon (Merck) с колонкой с отсечкой 10 кДа. Обработку протеазой SUMO (1 мг протеазы/200 мг белка вместе с 1 мМ DTT) проводили в течение ночи при 4 °C на шейкере. После этого проводили эксклюзионную хроматографию с использованием колонок HiLoad 16/60 Superdex 200 (GE Healthcare). Белок наносили на предварительно уравновешенную колонку с буфером (20 мМ Трис/HCl, pH 7.4, 100 мМ NaCl). Фракции собирали и анализировали с использованием SDS-PAGE и окрашивания кумасси бриллиантовым синим. Желаемые фракции объединяли, и после оценки концентрации белок разделяли на аликвоты, мгновенно замораживали и хранили при температуре -20°C.

Для нанотел GFP использовали колонку GSTrap (GE Healthcare). Процедура аффинной очистки была такой же, как описано выше, за исключением используемых буферов (буфер A: 140 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 10 мМ Na ₂ HPO ₄ , 1,8 мМ KH ₂ PO _{4 ₄ , 7.3; буфер B: 50 мМ трис/HCl, 10 мМ восстановленный глутатион, рН 8,0). После аффинной очистки белок делили на аликвоты и хранили при -20 °С.}

Очистку полноразмерного Tim44 для SPR и перекрестного связывания фото in vitro проводили следующим образом: клетки E. coli BL21, экспрессирующие His ₆-меченый полноразмерный Tim44 без предварительной последовательности, ресуспендировали в крекинг-буфере (20 мМ трис pH 8,0, 500 мМ NaCl, 15 мМ имидазола, одна полная таблетка ингибитора протеазы без ЭДТА, 2 мМ PMSF) и лизировали с помощью Emulsiflex.Лизат центрифугировали и отфильтрованный супернатант наносили на колонку HisTrap FF объемом 1 мл. После промывки 10% буфером А проводили элюцию ступенчато увеличивающейся концентрацией буфера Б (20 мМ Трис, рН 8,0, 500 мМ NaCl, 500 мМ имидазол). Фракции, содержащие белок, объединяли и проводили диализ в течение ночи при 4 °C в диализном буфере (10 мМ MOPS, 5 мМ MgCl ₂, 2 мМ KH ₂ PO ₄, 20 мМ KCl, 10 мМ имидазол). 7.5). Для анализа SPR белок дополнительно подвергали эксклюзионной хроматографии с использованием Superdex 75 HiLoad 16/60 (буфер: 50 мМ HEPES pH 7.4, 150 мМ NaCl, 50 мкМ ЭДТА).

His меченный Tim44 ^{C-термин} для SPR: С-концевой домен Tim44 (остатки 244–431) был клонирован в плазмиду pPROEX HTc, в результате чего была получена конструкция с N-концевой His ₆ меткой, за которой следовал сайт расщепления TEV. После трансформации в BL21 E. coli экспрессию получали путем индукции клеток 1 мМ IPTG в течение 4 часов при 37 °C. Очистку проводили так же, как и для полноразмерного Tim44, за исключением того, что используемый трис-буфер имел рН 7.4. Очищенный белок подвергали эксклюзионной хроматографии с использованием Superdex 75 HiLoad 16/60 с буфером, содержащим 50 мкМ ЭДТА, 50 мМ HEPES, pH 7,4, 150 мМ NaCl.

His помеченный Tim44 ^C-term для перекрестного связывания фотографий in vitro: Та же самая конструкция Tim44 ^C-term, как указано выше, была экспрессирована в клетках BL21 Tuner путем индукции 0,2 мМ IPTG в течение 5 часов при 30 °C. После лизиса в лизирующем буфере (50 мМ HEPES pH 7,5, 300 мМ KCl, 10 мМ имидазола, 5% (об./об.) глицерина, 1 мМ PMSF, одна полная таблетка ингибитора протеазы без ЭДТА и ДНКазы I) с использованием Emulsiflex очищенный лизат применяется к столбцу HisTrap.Белок элюировали линейным градиентом элюирующего буфера (50 мМ HEPES pH 7,5, 300 мМ KCl, 300 мМ имидазола, 5% (об. /об.) глицерина). Объединенные фракции, содержащие белок, концентрировали и подвергали эксклюзионной хроматографии (буфер: 50 мМ HEPES, pH 7,5, 200 мМ KCl, 5% (об./об.) глицерина) с использованием Superdex 75 HiLoad 16/60. Фракции, содержащие белок, объединяли и определяли концентрацию белка с использованием анализа Бредфорда.

Импорт белков-предшественников и создание суперкомплекса TOM-TIM23

Для синтеза [³⁵ S] метионин-меченого белка F1β сначала использовали набор для транскрипции mMessagemMachine SP6 (Invitrogen, CA, USA) для получения мРНК в vitro в соответствии с инструкциями производителя.Затем была проведена трансляция in vitro с использованием системы лизата ретикулоцитов Flexi Rabbit (Promega, WI, USA). Приготовленные лизаты использовали непосредственно для реакций импорта.

Импорт радиоактивно меченого предшественника или рекомбинантного белка осуществляли, как описано ранее ⁶¹ . Вкратце, митохондрии суспендировали в импортном буфере (250 мМ сахарозы, 10 мМ MOPS/KOH, pH 7,2, 80 мМ KCl, 2 мМ KH ₂ PO ₄, 5 мМ MgCl ₂, 5 мМ MgCl ₂, БСА без жирных кислот) с добавлением 2 мМ АТФ, 2 мМ НАДН, 5 мМ креатинфосфата и 0. 1 мг/мл креатинкиназы, чтобы получить конечную концентрацию 1 мкг/мкл. Импорт выполняли в нужные моменты времени (30 мин для Jac1 ^sfGFP, 15 мин для [³⁵ S] F1β) при 25°С при легком встряхивании и завершали добавлением 1% AVO (конечная концентрация 1 мкМ валиномина, 8 мкМ антимицина А и 20 мкМ олигомицина). Неимпортированные предшественники расщепляли обработкой 20 мкг/мл протеиназы K (PK) в течение 10 минут, когда это требовалось. PK-реакцию инактивировали 2 мМ PMSF. Затем митохондрии осаждали и промывали буфером SEM.Образцы анализировали с помощью SDS-PAGE или BN-PAGE в сочетании с вестерн-блоттингом или авторадиографией. После цифровой авторадиографии количественные оценки были выполнены с использованием ImageQuant TL (GE Healthcare, Нью-Джерси, США) с использованием вычитания фона с катящимся шариком. Результаты были рассчитаны как среднее ± ± SEM, n = 4 и графически представлены с использованием GraphPad Prism 8.

Для анализа остановки импорта указанные количества рекомбинантно очищенного Jac1 ^sfGFP были импортированы в митохондрии в течение 30 мин. Затем митохондрии осаждали и ресуспендировали в свежем импортном буфере. Затем последовал импорт 6% ³⁵ S-меченого F1β в течение 15 мин. После этого митохондрии обрабатывали, как описано выше, и анализировали с помощью SDS-PAGE и авторадиографии.

Анализ модификации цистеина

Митохондрии и митопласты в концентрации 1 мг/мл были получены путем инкубации изолированных митохондрий от Tim23 WT и мутантов по цистеину в СЭМ (250 мМ сахарозы, 20 мМ MOPS/KOH, pH 7.2, 1 мМ ЭДТА) и EM (20 мМ MOPS/KOH, pH 7,2, 1 мМ ЭДТА) соответственно в течение 15 мин на льду. Затем их обрабатывали активированным малеимидом стрептавидином (Thermo Fisher Scientific) в конечной концентрации 1 мг/мл и инкубировали в течение 30 минут на льду, а затем в течение 60 минут при 25°C. Образцы собирали центрифугированием и ресуспендировали в красителе для загрузки белка, содержащем бета-меркаптоэтанол. После этого их кипятили при 95 °C в течение 5 минут и анализировали с помощью гелей NuPAGE ^TM 4-12% Bis-Tris и иммуноблотинга с использованием антитела Tim23 ^IMS. Изображения для Tim23 ^T9C были получены в цифровом виде (Amersham™ ImageQuant™ 800) из-за слабого обнаружения Tim23 ^T9C этим антителом с рентгеновскими пленками.

Анализ фотосшивки

Фотосшивание в organello проводили, как описано ранее ²² . Вкратце, митохондрии ресуспендировали до концентрации 1 мкг/мл в импортном буфере без BSA, дополненном 1 мМ АТФ и 1 мМ НАДН. AVO добавляли для контроля мембранного потенциала.После инкубации в течение 2 мин при 25°С добавляли фотопептиды pL ₁₉ B и pS ₁₆ B до конечной концентрации 2 мкМ и инкубировали в течение 10 мин на льду. Затем фотопептиды сшивали в течение 30 мин на льду с использованием галогенной лампы на парах металлов и стеклянного экрана для защиты белков от высокоэнергетического излучения. После центрифугирования и промывания буфером для SEM митохондрии ресуспендировали в красителе для загрузки белка и анализировали с помощью SDS PAGE и вестерн-блоттинга.

Для перекрестного связывания фотографий in vitro очищенный полноразмерный Tim44 смешивали в эквимолярном соотношении с пептидами предварительной последовательности pL ₁₉ B и pS ₁₆ B или 10 мМ уксусной кислоты, инкубировали в течение 10 минут на льду и подвергали поперечному сшиванию. в течение 30 минут на льду.Фотоаддукты анализировали с помощью SDS-PAGE, окрашивания коллоидным кумасси и иммуноблотинга (пероксидаза-стрептавидин, Jackson ImmunoResearch Lab, кат. № 016-030-084). Для Tim44 ^C-term очищенный белок в буфере 25 мМ HEPES pH 7,5, 100 мМ KCl, 5 мМ MgCl ₂ инкубировали с пептидами предварительной последовательности в эквимолярном соотношении. Сшивку и анализ проводили так же, как описано выше.

Градиенты плотности глицерина

Градиенты 10-30% глицерина готовили путем смешивания 10% глицеринового буфера (10% глицерин, 20 мМ Трис/HCl, pH 7.4, 100 мМ NaCl, 5 мМ ЭДТА, 0,3 % дигитонина) и 30 % глицеринового буфера (30 % глицерина, 20 мМ Трис/HCl, pH 7,4, 100 мМ NaCl, 5 мМ ЭДТА, 0,3 % дигитонина) с использованием предварительно запрограммированных условий. для градиентов глицерина 10-30% на Gradient Master (BioComp Instruments). Затем их охлаждали при 4°С в течение 2–3 ч. Солюбилизированные митохондрии после инкубации с буфером или Jac1 ^sfGFP в течение 30 мин накладывали на градиенты, после чего проводили ультрацентрифугирование в роторах Sw60Ti (Beckmann Coulter) в течение 18 ч при 121 262 × г при 4°С.Фракции собирали сверху и анализировали с помощью SDS-PAGE с последующей иммунодеструкцией. Сигналы количественно определяли с использованием ImageQuant TL.

Выделение комплексов

Для выделения белковых комплексов использовались две разные стратегии: 1) использование нанотел GFP для выделения суперкомплекса TOM-TIM23, образованного импортом Jac1 ^sfGFP, или 2) выделение комплекса TIM23 с использованием His -Тэг SUMOstar на Tim23.

В первом подходе после образования суперкомплекса TOM-TIM23 митохондрии осаждали, промывали с помощью SEM и солюбилизировали в солюбилизирующем буфере (20 мМ HEPES/KOH, pH 7. 4, 150 мМ NaCl, 10 % глицерина, 0,1 мМ ЭДТА, 1 % дигитонина, 1 мМ PMSF). Гранулы стреп-тактин-сефарозы (IBA) уравновешивали водой и PBS. Гранулы инкубировали с очищенным нанотелом GFP в течение 1 часа при комнатной температуре при встряхивании. Затем гранулы промывали 2-кратным буфером (40 мМ HEPES/KOH, pH 7,4, 300 мМ NaCl, 40% глицерина и 0,2 мМ ЭДТА) и солюбилизирующим буфером. На гранулы наносили осветленный супернатант солюбилизированных митохондрий и проводили связывание в течение 1 ч при 4°С.После этого шарики промывали буфером, содержащим 0,3% дигитонина. Элюцию проводили 7,5 мМ дестиобиотина. Образцы анализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга (анти-GFP, Roche, кат. № 11814460001). Общее количество всегда загружали при 5% элюции, если не указано иное.

Для выделения комплекса TIM23 использовали ^{штаммов дрожжей HisS*} Tim23. В этих штаммах эндогенный Tim23 был заменен на ^HisS* Tim23. Митохондрии этого штамма инкубировали с буфером Jac1 ^{или sfGFP}. Агарозные шарики Ni ²⁺ -NTA (Macherey Nagel) промывали 2× буфером и буфером для солюбилизации. Солюбилизированные митохондрии инкубировали с уравновешенными шариками в течение 2–3 ч при 4°С при легком встряхивании. Гранулы промывали буфером без PMSF и элюировали 1 мкМ протеазы SUMOstar (любезно предоставленной доктором Александром Штейном) в промывочном буфере без PMSF в течение 1 часа при 4 °C. Для митохондрий, которые были подвергнуты импорту Jac1 ^sfGFP, после выделения комплекса TIM23 может быть добавлен второй этап выделения нанотел GFP.Эта двухэтапная стратегия изоляции приводит к специфической изоляции суперкомплекса TOM-TIM23. Образцы, полученные после выделения, оценивали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга или непосредственно подвергали анализу сшивки-MS.

Для анализа количества копий субъединиц митохондриальной транслоказы был проведен анализ ALFA IP и FLAG IP. Вкратце, митохондрии дрожжевых клеток, экспрессирующих эндогенные и меченые белки для Tim23, Tim50, Tim17, Tim44, Pam16, Pam18 и Tim21, солюбилизировали в 1% буфере для солюбилизации дигитонина, как описано ранее. Осветленные экстракты инкубировали с уравновешенными гранулами ALFA Selector ^ST (NanoTag Biotechnologies) или FLAG в течение 1 ч при 4°C. После нескольких циклов промывки проводили элюирование с использованием красителя SDS Protein. Образцы анализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга (анти-ALFA, NanoTag Biotechnologies, кат. № N1502-HRP; анти-FLAG, Sigma, кат. № F3165). Изображения обрабатывались с помощью ImageJ v1.47. Полный список антител, использованных в этом исследовании, а также их разведения представлен в дополнительной таблице 4.

Поверхностный плазмонный резонанс — SPR

Связывание pALDH и pALDH-s с различными 6xHis-мечеными лигандами Tim44 анализировали с использованием поверхностного плазмонного резонанса. Эксперименты SPR проводили на биосенсоре Reichert SPR (SR700DC, Xantec Bioanalytics, Дюссельдорф, Германия), оснащенном сенсорным чипом Ni2+-хелатора (NiHC500m, Xantec Bioanalytics, Дюссельдорф, Германия) в рабочем буфере (50 мМ HEPES, pH 7,4, 150 мМ NaCl). , 50 мкМ ЭДТА) при 20 °C. Лиганды разбавляли в рабочем буфере до конечной концентрации 200 нМ и вводили поверх активированной Ni2+ левой стороны поверхности сенсорного чипа ППР со скоростью потока 30 мкл/мин до конечного отклика ~2500 мкРИ (микроединицы показателя преломления). .Правый канал использовался как эталонный канал, а левый не изменялся. Аналиты серийно разводили в рабочем буфере (16, 8, 4, 2, 1, 0,5, 0,25 и 0,125 мкМ) и вводили через оба канала со скоростью потока 40 мкл/мин. За ассоциацией и диссоциацией каждого аналита следили в течение 4,5 и 7 мин соответственно. Для каждого анализируемого вещества выполняли две инъекции буфера, которые использовали в качестве эталонного буфера. Полученные данные об ответе анализировали, а кинетические и равновесные параметры связывания определяли с помощью Scrubber 2.0 (программное обеспечение BioLogic). На каждый набор данных была дана двойная ссылка (опорный канал, буферные инъекции/опорный буфер). Эксперименты в основном проводились, как описано ранее ²⁵ .

Анализ перекрестных связей

Для анализа перекрестных связей в SDS-PAGE было проведено двухэтапное выделение суперкомплекса из митохондрий ^HisS* Tim23 после импорта Jac1 ^sfGFP. Выделенный комплекс обрабатывали ДМСО, 2 мМ DSS, 2 мМ DSSO и 10 мМ EDC в течение 2 ч на льду.Реакцию перекрестного связывания гасили 250 мкМ глицина, рН 8,0, в течение 30 минут на льду. Образцы анализировали с помощью вестерн-блоттинга. Кроме того, для анализа перекрестных связей между Tim21 и Tom22 митохондрии ^HisS* Tim23 и ^HisS* Tim23 tim21∆ подвергали импорту Jac1 ^sfGFP с последующим выделением комплекса TIM23. Элюированные фракции обрабатывали ДМСО или 2 мМ DSS, гасили глицином и анализировали с помощью SDS-PAGE и иммуноблоттинга.

Для выделения комплекса TIM23 с последующим сшиванием и масс-спектрометрией (подход 1) комплекс TIM23 выделяли после импорта буфера или Jac1 ^sfGFP .Выделенный комплекс обрабатывали 2 мМ DSS или 10 мМ EDC в течение 3 ч на льду с последующим гашением реакции 250 мкМ глицина, рН 8,0, в течение 30 мин. Белки осаждали в течение ночи при -20°С с использованием 80% ацетона. На следующий день образцы центрифугировали. Для перекрестного связывания SDA к выделенному комплексу добавляли 2 мМ SDA (Thermo Fisher Scientific) на 2 часа при 4 °C. Реакцию перекрестного связывания гасили 50 мМ Tris-HCl, и белки подвергали диализу против буфера для восстановления через мембранный фильтр (MF Membrane Filters, 0.025 мкм КСВП, Merck). После этого образцы облучали УФ-светом (365 нм) в течение 5 мин при 4 °C.

Для перекрестного связывания в органелле (подход 2), ^HisS* митохондрии Tim23 инкубировали с буфером или Jac1 ^sfGFP . После центрифугирования и промывания HN-буфером (20 мМ HEPES, pH 7,4, 100 мМ NaCl) митохондрии ресуспендировали в HN-буфере и подвергали перекрестному связыванию с 1 мМ DSS или 5 мМ EDC/10 мМ Sulfo NHS в течение 3 ч на льду. Реакцию гасили 50 мМ трис pH 8.0 или 50 мМ Трис pH 8,0/20 мМ DTT для образцов DSS и EDC соответственно. Образцы центрифугировали и анализировали с помощью масс-спектрометрии.

Для импорта Jac1 ^sfGFP с последующим перекрестным связыванием DSS и выделением комплекса TIM23 (подход 3), ^{митохондрий HisS*} Tim23 инкубировали с буфером или Jac1 ^sfGFP. Собранные митохондрии ресуспендировали в буфере HN и перекрестно связывали с 1 мМ DSS в течение 3 часов на льду. Реакцию гасили, используя 50 мМ Трис, рН 8,0, и выделение комплекса TIM23 проводили, как описано ранее.Выделенный комплекс осаждали ацетоном и подвергали масс-спектрометрическому анализу.

Расщепление белков и обогащение сшитых пептидов

Сшитые белки ресуспендировали в 4 мМ мочевины/50 мМ бикарбоната аммония, восстанавливали 10 мМ дитиотреитола и затем алкилировали 40 мМ йодацетамидом. Белки расщепляли эндопротеиназой трипсином в соотношении фермент-белок 1:50 в присутствии 1М мочевины при 37°С в течение ночи. Реакцию останавливали 0.5% трифторуксусной кислоты (TFA) (об./об.) и пептиды обессоливали на колонках MicroSpin (Harvard Apparatus) в соответствии с инструкциями производителя. Высушенные в вакууме пептиды ресуспендировали в 50 мкл 30% ацетонитрила/0,1% ТФУ. Сшитые пептиды обогащали с помощью эксклюзионной хроматографии пептидов (колонка SuperdexPeptide 3.2/300, GE Healthcare) ⁶² или обращенно-фазовой хроматографии с щелочным рН (для образцов SDA). Собирали фракции по 50 мкл. Ранние элюированные фракции, содержащие сшитые пептиды, подвергали анализу ЖХ-МС/МС.

Для перекрестного связывания в органелле (подход 2): перекрестно-сшитые митохондрии DSS или EDC лизировали 2% SDS, осаждали при -80°C в течение 2 часов, расщепляли трипсином в течение ночи в присутствии 1M мочевины. и обогащены сшитыми пептидами пептидом SEC. Затем были измерены первые семь фракций 3-часовым методом, и, кроме того, эти фракции были объединены и разделены с помощью основного RP. Из них было собрано и измерено 24 фракции.

Для подхода 3 сшитые комплексы осаждали ацетоном, осаждали центрифугированием, растворяли в 50 мМ бикарбоната аммония (pH 8.0) с добавлением 6 M мочевины, восстановлением трис(2-карбоксиэтил)фосфином (TCEP) и алкилированием хлорацетамидом. После разбавления до 1 М мочевины с 50 мМ бикарбоната аммония сшитые комплексы расщепляли трипсином (Promega) в соотношении фермент-белок 1:20 (масс./масс.) при 37°С в течение ночи. Пептиды экстрагировали с обращенной фазой с использованием SepPak Vac tC18 1cc/50 мг (Waters) и элюировали смесью 50% ацетонитрила (ACN)/0,1% трифторуксусной кислоты (TFA). Элюаты лиофилизировали, растворяли в 40 мкл 30% АЦН/0.1% TFA и подвергали эксклюзионной хроматографии пептидов (pSEC, с использованием колонки Superdex Peptide PC3.2/300, GE Healthcare) при скорости потока 50 мкл/мин с использованием системы ВЭЖХ Agilent серии 1200. Собирали фракции по 50 мкл.

Анализ ЖХ-МС/МС

Анализы ЖХ-МС/МС проводились, как описано в другом месте ⁶³ . Вкратце, пептиды, сшитые с помощью DSS, измеряли в технических дубликатах на масс-спектрометре Orbitrap Fusion или Fusion Lumos Tribrid, подключенном к системе УВЭЖХ Dionex UltiMate 3000 (оба — Thermo Fisher Scientific), оснащенной колонкой C18 (ReproSil-Pur). 120 С18-АК, 1.Размер пор 9 мкм, внутренний диаметр 75 мкм, длина 30 см, Dr. Maisch GmbH). Полные сканы MS1 были получены в орбитальной ловушке (OT) с разрешением 120 000, временем инжекции (IT) 60 мс и целевым значением автоматической регулировки усиления (AGC) 5 × 10 ⁵ . Динамическое исключение (DE) было установлено на 10 с, и для фрагментации учитывались только состояния заряда от 3 до 8. Спектры MS2 были получены в ОТ 20 наиболее распространенных ионов-предшественников; разрешение было установлено на 30 000; IT до 120 мс и цель AGC до 5 × 10 ⁴ .Фрагментация была усилена диссоциацией столкновений с более высокой энергией (HCD) при 30% NCE.

Пептиды, сшитые с EDC и SDA, измеряли со следующими изменениями: использовали масс-спектрометр Q Exactive HF-X и масс-спектрометр Q Exactive HF (Thermo Fisher Scientific) соответственно; IT был установлен на 50 мс, а цель AGC на 1×10 ⁶ на уровне MS1. На уровне MS2 IT было установлено на 128 мс, а цель AGC — на 1 × 10 ⁵ . DE покрыл 30 мс. Для фрагментации рассматривались 30 наиболее распространенных ионов-предшественников.

Для анализа сшитых пептидов из подхода 3 фракции, обогащенные сшитыми пептидами, высушивали в вакууме, растворяли в 5% ACN/0,1% TFA и затем анализировали в двух повторностях на масс-спектрометре Thermo Orbitrap Fusion Tribrid, соединенном с Система Dionex UltiMate 3000 uHPLC (Thermo Scientific) со специальной колонкой C18 диаметром 30 см (внутренний диаметр 75 мкм, заполненная гранулами ReproSil-Pur 120 C18-AQ, размер пор 1,9 мкм, Dr. Maisch GmbH). Разрешение MS1 и MS2 было установлено на 120 000 и 30 000 соответственно.Только предшественники с состоянием заряда 3-8 были активированы для MS2.

Анализ данных

Необработанные файлы, полученные для образцов, сшитых с помощью DSS, были преобразованы в файл формата mgf с помощью Proteome Discoverer (v. 1.4, Thermo Fisher Scientific). Отношение сигнал/шум было установлено равным 1,5, а масса прекурсора — от 1000 до 10000 Да. Файлы mgf анализировали с помощью pLink 1 (v. 1.23) для идентификации сшитых пептидов ⁶⁴ . Были применены настройки по умолчанию с карбамидометилированием остатков цистеина в качестве фиксированной модификации и окислением остатков метионина в качестве переменной модификации.Коэффициент ложного обнаружения (FDR) был установлен равным 1% на уровне спектра. Для поиска образцов, включая предшественник, была предоставлена специальная база данных белков, включающая известные белки комплекса TOM-TIM23. Для образцов без предшественника базы данных белков содержали все идентифицированные белки на основе идентификации линейных пептидов с помощью MaxQuant (v. 1.6.0.1) ⁶⁵ . Совпадения спектра сшитых пептидов (CSM) оценивали вручную. Результаты перекрестного связывания были визуализированы с помощью xiNET ⁶⁶.

Необработанные файлы, которые были получены для образцов, сшитых с EDC и SDA, были проанализированы с помощью pLink 2 (v. 2.3.9) для идентификации сшитых пептидов ⁶⁷ . Были применены следующие изменения по сравнению с анализом, описанным с помощью pLink 1: FDR был установлен ниже 5% на уровне спектра; CSM не оценивались вручную.

Поиск файлов, полученных в результате перекрестного связывания в organello (подход 2), выполнялся с помощью pLink2 по специальной базе данных TOMTIM, а также по 300 наиболее распространенным белкам, которые были идентифицированы в образцах (плюс специальные белки TOMTIM, включенные ).

Подход 3 межбелковых перекрестных связи были идентифицированы с помощью поисковой системы pLink (v. 2.3.9) (pfind.ict.ac.cn/software/pLink) ^64,67 с использованием либо полного SwissProt S. cerevisiae или пользовательская база данных, содержащая 125 белков, наиболее часто присутствующих в образцах. Результаты показаны после фильтрации при FDR 1% (более строгий) или 5%.

Завершение атомной модели комплекса
S. cerevisiae TOM40
Комплекс S. cerevisiae TOM (идентификатор PDB: 6JNF, идентификатор EMDB: 9851) был завершен путем восстановления нескольких недостающих петель Tom40 с помощью инструментов ROSETTA ^{9 использование крио-ЭМ карты в качестве пространственных ограничений. Использовалась как депонированная, так и отфильтрованная крио-ЭМ карта с разрешением 4,0 Å (дополнительный рисунок 4a, b). Отсутствующий С-концевой хвост Tom22 (остатки 131-152, всего 22) был построен с использованием протокола сворачивания ab initio, реализованного в ROSETTA ⁵². Для этой цели было получено более 350 000 ловушек длинного С-концевого хвоста из 32 остатков (остатки 121–152). Дополнительные 10 остатков, следующих за отсутствующей последовательностью, были добавлены, чтобы увеличить вероятность получения С-концевых конформаций, совместимых со структурно охарактеризованной частью, которые впоследствии можно было бы использовать для наложения известной части Tom22 (остатки 121-130) на вновь свернутую фрагмент.Лучшие 1000 моделей ab initio, согласно общей оценке ROSETTA, были подвергнуты кластерному анализу с использованием программного обеспечения MaxCluster (http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/maxcluster). При кластеризации использовался метод попарного ближайшего соседа (PNN), использующий попарное вычисление RMSD (среднеквадратичное отклонение) по методу «все против всех», в результате чего 899 ложных целей были распределены по 26 кластерам при пороге 0,55 Å. Окончательная модель ab initio была выбрана из кластера, включающего наибольшее количество лучших ложных целей (кластер с наименьшей энергией, общий размер 133 ложных объекта, разброс 0.472 Å). Несколько приманок с самой низкой энергией (1-я, 5-я, 10-я), составляющие этот кластер, были вручную проверены в Coot ⁶⁹ и наложены на структурно охарактеризованный С-концевой фрагмент Tom22 (остатки 120–131, PDB id: 6JNF). Приманку с наилучшей общей подгонкой (10-е место в рейтинге ROSETTA) использовали в качестве шаблона для восстановления отсутствующих 22 остатков длинного С-конца Tom22.}

Атомные модели компонентов IMS Tim

Атомная модель митохондриального белка Jac1, содержащего J-домен (остатки 1–47 цепи A, PDB id: 3UO3), была вручную реконструирована в Coot таким образом, чтобы его N-концевой фрагмент адаптировался расширенная конформация, которая может легко проходить через β-ствол Tom40.Элементы вторичной структуры не изменены (только фрагменты петель). Структурные модели Sc. Tim21 (остатки 100–225, идентификатор PDB: 2CIU) и Sc. Tim50 (остатки 162–361, идентификатор PDB: 3QLE), а также структура ЯМР Sc. Tim23 (гомодимер, остатки 1–222 цепей A и B, идентификатор PDB: 7CLV) загружали из PDB. Атомная модель Tim23 выявила динамическую природу (очень высокую гибкость) его N-концевого хвоста длиной в шестьдесят остатков в растворе. Ни один из 15 депонированных конформеров не удовлетворял наблюдаемым поперечным связям, поэтому N-концевой хвост длиной 60 аминокислот был смоделирован с использованием протокола молекулярного моделирования, управляемого поперечными связями, ⁷⁰ с использованием ROSETTA ab initio folding ⁵² .Пространственные ограничения, полученные из перекрестных связей, были включены в виде плоской гармонической функции. Это гарантировало, что модели будут наказаны только в том случае, если евклидово расстояние между двумя сшитыми атомами превысит указанный порог. В случае перекрестных связей DSS (K8-K32, K32-K25), полученных для комплекса Tim23 без блокирующего пептида, пороги CA-CA и CB-CB были установлены на 30 и 22 Å соответственно. Дополнительные более короткие пространственные ограничения на основе перекрестных связей, полученные на основе EDC (10 Å: M1-D12, M1-D13; 14 Å: D22-K27), использовались для расчета одной трети ложных целей.Разница в применяемой длине пространственных ограничений, полученных из перекрестных связей EDC, возникает из-за того, что разные отдельные атомы выбраны для ограничений расстояния и в то же время присутствуют на этапе ab initio с низким разрешением. Из более чем 421 000 ложных целей ab initio было проанализировано 5000 моделей с наименьшей оценкой ROSETTA, чтобы выбрать те, которые удовлетворяют пространственным ограничениям, полученным с помощью перекрестных связей DSS и EDC. Эти ловушки были подвергнуты кластерному анализу с использованием программы MaxCluster. Окончательная модель, содержащая 60 N-концевых аминокислот Sc.Tim23 (номер 2, вторая лучшая ложная цель согласно оценке ROSETTA) был выбран из кластера, включающего наибольшее количество ложных целей с самой низкой энергией (кластер с самой низкой энергией). Перед докингом с ROSETTA ⁷¹ две копии N-концевого фрагмента, по одной для каждой цепи, вручную помещали в непосредственной близости от оставшейся части Tim23 (конформер 12) для соблюдения ограничений, основанных на перекрестных связях: DSS : К66-К25, К66-К32. Это позволило нам пропустить этап глобальной стыковки с низким разрешением и использовать протокол стыковки с высоким разрешением ROSETTA ⁷² .Стыковка производилась последовательно. При размещении первого N-концевого фрагмента второй стыковали с моделью, включающей уже размещенный. Для каждой стыковки было создано не менее 100 000 ложных целей с использованием стандартных настроек, реализованных в протоколе локальной стыковки высокого разрешения ROSETTA. Никакие позиционные ограничения, полученные в результате экспериментов с поперечными связями, не применялись во время расчетов стыковки. Эти ограничения использовались только для проверки. Следует отметить, что протокол докинга ROSETTA не приводил к значительному изменению положения докинговых молекул по сравнению с их исходными положениями. Расчетные среднеквадратичные отклонения были ниже 1 Å и 3 Å для моделей с наилучшей оценкой (I_sc) первого и второго пристыкованных N-концевых фрагментов соответственно. Лучшие 100 ложных целей, ранжированные на основе I_sc, были проверены в Pymol, и их различия в положении были оценены путем вычисления RMSD по сравнению с ложной целью с наименьшим показателем I_sc (молекула-мишень). Суперпозиция не применялась. В случае первого пристыкованного N-концевого фрагмента 90 ложных целей показали разницу СКО менее 0,25 Å, в то время как в случае второго N-концевого фрагмента только шесть ложных целей образовали кластер с максимальным СКО равным 0.45 Å. Эти два пристыкованных N-концевых фрагмента с наименьшими показателями интерфейса (I_sc) использовали для замены координат соответствующих фрагментов 12-го конформера Sc. Структура Tim23 (цепи A и B, остатки 1–60). Чтобы обеспечить более полную сборку компонентов IMS Tim, отсутствующая атомная модель С-концевого домена Sc. Tim50 (остатки 348-476) моделировали с использованием вышеупомянутого протокола молекулярного моделирования с перекрестными связями ⁷⁰ с использованием фолдинга ab initio ROSETTA ⁵² . Было создано три набора из не менее 150 000 ложных целей с использованием разного количества пространственных ограничений, полученных из перекрестных связей. Набор 1 был создан с использованием чистого протокола свертывания ab initio (без каких-либо пространственных ограничений). Наборы номер 2 и 3 состояли из ложных целей, рассчитанных с использованием восьми и десяти (максимальное количество) ограничений, полученных с помощью поперечных связей, соответственно. Для каждого набора было выбрано 5000 лучших ложных целей на основе общего балла ROSETTA и подвергнуто анализу, в результате чего были получены те, которые удовлетворяют ограничениям, полученным на основе перекрестных связей (вышеупомянутые пороговые значения расстояния использовались для перекрестных ссылок DSS).Из этих ложных целей три репрезентативных набора из 26 моделей, выбранных на основе наименьшего общего балла ROSETTA, были подвергнуты кластерному анализу с использованием MaxCluster. При кластеризации с использованием метода кластеризации ближайших соседей все 78 ложных целей были объединены в 1 кластер с порогом 0,8 Å (разброс кластеров 0,69 Å). Окончательная ab initio модель С-концевого домена Sc. Tim50 был выбран на основе оценки ROSETTA и принадлежал к набору 1 (чистое моделирование ab initio). Эта ловушка была наложена на структурно охарактеризованный домен Sc.Tim50 основан на α-спиральном фрагменте, присутствующем как в кристаллической структуре (идентификатор PDB: 3QLE), так и в модели ab initio (остатки 339–358). Наложение этих двух доменов удовлетворяло экспериментально полученным пространственным ограничениям на основе перекрестных связей DSS между двумя доменами Tim50 (K281-K348 и K288-K349). Относительное положение собранных вручную доменов Sc. Tim50 был оптимизирован с использованием протокола стыковки с высоким разрешением, реализованного в ROSETTA ⁷², без использования каких-либо ограничений расстояния на основе перекрестных ссылок.Из 10 000 ложных целей 100 моделей, отобранных на основе оценки I_sc, были проверены в Pymol, и различия в их взаимном расположении были проанализированы с использованием вышеупомянутого подхода (расчет RMSD относительно ложной цели с наименьшей оценкой I_sc). Этот анализ показал, что рассчитанное СКО между атомами Cα, составляющими пристыкованный C-конец Sc. Домен Tim 50 был ниже 2,0 Å для 80 ложных целей, в то время как 11 из них были расположены на расстоянии 1,0 Å по сравнению с целевой моделью.Завершенный Sc. Модель Tim50, включающая кристаллическую структуру (идентификатор PDB: 3QLE) и пристыкованный С-концевой ab initio складчатый домен, использовали для построения сборки компонентов TOM-TIM23.

Моделирование сборки TOM-TIM23

Подготовленные атомные модели компонентов Tim50 были вручную собраны в Pymol относительно готового комплекса TOM, чтобы удовлетворить максимальное количество межмолекулярных пространственных ограничений, полученных из поперечных связей, и максимально увеличить компактность. всего собрания.В дальнейшем положение отдельных компонентов (Tim21, Tim50) последовательно оптимизировали с использованием вышеупомянутого протокола стыковки ROSETTA. Должность ск. Tim23 относительно Sc. Комплекс ТОМ не был оптимизирован подходом докинга ROSETTA, поскольку наблюдаемые поперечные связи образовывались между гибкими фрагментами двух компартментов, закрепленными на мембранах, разделенных IMS, и формируя, скорее всего, только временное взаимодействие. Расчеты стыковки проводились без каких-либо позиционных ограничений.100 ложных целей, выбранных на основе их оценки I_sc, были проверены в Pymol и сгруппированы на основе их RMSD, рассчитанного без наложения по сравнению с моделью (целью) с лучшими оценками. Изначально структура Tim21 была состыкована с Tom22 (19 000 ложных целей). Анализ на основе среднеквадратичного отклонения показал, что семь ложных целей были расположены практически одинаково (среднеквадратичное отклонение, рассчитанное относительно молекулы-мишени, было ниже 0,5 Å), в то время как у оставшихся 91 ложных целей среднеквадратичное отклонение было ниже 6 Å. Наконец, Sc. Tim50 был состыкован со сборкой TOM-Tim21-Tim23 (119 000 ложных целей).По сравнению с целевой ложной целью 5 ложных целей показали разницу СКО менее 0,5 Å, в то время как в общей сложности 96 показали разницу СКО менее 1,9 Å. Оптимизированная сборка компонентов Tim50-TOM IMS была проверена с использованием ограничителей на основе перекрестных связей. Следует отметить, что смоделированная сборка является лишь снимком высокодинамичной системы и потенциально может быть неполной с точки зрения участвующих компонентов. Основная цель предпринятого подхода к моделированию состояла в том, чтобы визуализировать тесноту пространства МСМ с использованием доступных атомарных моделей, которые отражают как размеры, так и размеры используемых отсеков.Необходимые ручные настройки модели были выполнены в Coot ⁶⁹. Рисунки были сделаны с помощью Pymol (www.pymol.org).

Сводка отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Кратком отчете об исследовании природы, связанном с этой статьей.

Том | Вик Викия | Фэндом

Том

Том — 3-й или 4-й встреченный ребенок, появляющийся в 2 часа ночи и позже. Том представляет собой изуродованное человеческое существо, тело которого чем-то напоминает тело ребенка в раннем подростковом возрасте.Он брат-близнец Тима. Он носит белую сломанную маску с вырезанным на ней жестким хмурым взглядом, а также рваную школьную форму.

Поведение

Том ведет себя очень странно, бросая вызов логике несколькими способами. Как Лилиан и Тим, Том будет играть со своими жертвами, ненадолго телепортируясь прямо в их поле зрения. Это также вызывает сбои в зрении игрока, что относится ко всем случаям, когда Том слишком долго смотрит на него.

Том постоянно напоминает о своем присутствии, когда он активен в течение часа, например, когда игрок видит его периферийным зрением.Его шаги можно услышать во время ходьбы, что похоже на то, что делает Тим; однако шаги Тома намного быстрее. Игроки также иногда могут слышать внезапные задыхающиеся и задыхающиеся звуки Тома.

У Тома есть три разных движения:

Он появится в поле зрения игрока на расстоянии нескольких футов и будет появляться каждый раз, когда игрок пытается отвести взгляд. Самый быстрый способ избежать этого — заставить Сэма или ТБуббера смотреть прямо над собой. Это движение часто является частью крещендо.

Игрок поворачивает в нужный момент, когда Том уже какое-то время следует за ним. Игрок может убежать от этого движения вместо того, чтобы просто отвести взгляд, что может быть выгодно, если ему нужно избегать преследования другого ребенка, такого как Тим.

Том скопирует себя и окружит игрока из ниоткуда. В этом движении он проявляет себя, поднимаясь с земли в потоке сажи и зеленого огня, который обжигает землю. Он выглядит как скомканный беспорядок, затем быстро разворачивает свои сломанные конечности и поднимается на ноги.Он всегда появляется лицом к игроку, но на самом деле пытается повернуть голову, чтобы посмотреть на него. Чтобы избежать этого, лучше всего смотреть вниз или вверх, пока тема погони Тома или треск из его шеи не прекратятся.

Во всех атаках Тома главное, что игроки должны сделать, чтобы выжить, — это не смотреть прямо на него. Чтобы указать, что игрок слишком много смотрит на Тома, он испускает искаженный крик, из-за чего зрение игрока начинает давать сбои. Как только игрок посмотрит на него достаточно долго, Том начнет анимацию смерти, поднявшись с земли и плывя с невероятно высокой скоростью к игроку, или просто наклонившись к нему.

Тома можно увидеть исчезающим в облаке зеленого огня, если игрок сможет избежать его.

Анимация смерти

Том схватит игрока за шею. Он душит их и бросает на землю, затем уходит.

Копируя своего брата Тима, Том ударит игрока обмякшей правой рукой. Он сбивает игрока с ног и добивает его, ударяя по нему обеими руками.

Том схватит игрока, задушит его и повалит на землю.Затем он добивает их, поднимая правую руку и ударяя игрока по лицу.

Том показан в анимации смерти со своим братом-близнецом. Тим отвлекает игрока, а Том пробирается внутрь и толкает игрока вниз. Близнецы подойдут к упавшему игроку, когда потеряют сознание. Следует отметить, что технически это анимация смерти Тима, так как она активируется только в том случае, если Тим поймает ее.

Описание

Том, близнец Тима, очень похож на него, но во внешности есть много ключевых отличий.

У Тома спутанные темно-каштановые волосы с прямым пробором. Его челка закрывает правый глаз маски. Маска, которую он носит, похожа на маску Тима, но треснута в двух местах и изображает грустное лицо. Большая трещина на левом глазу маски показывает коричневый глаз. Его кожа серого цвета, а тело изрешечено множеством травм. Помимо типичных царапин и порезов, как у его братьев и сестер, большинство, если не все его кости кажутся тем или иным образом сломанными. Его позвоночник кажется сильно согнутым, а кости на правом локте и левой ноге обнажены.Его правое колено сгибается под странным углом, в результате чего ступня поворачивается внутрь. Его левая нога безвольна, и он стоит на лодыжке.

Одежда Тома порвана по неизвестной причине. Галстук у него будто порезан и выдернут из рубашки, а лацканы майки взлохмачены. Рукава майки порваны и грязные на концах. Его жилет разорван на конце, обнажая нижнюю рубашку, а правая штанина разорвана, что делает ее короче другой. Как и Тим, Том носит пару шлепанцев и короткие носки.

И Том, и Тим издают кашляющие и хриплые звуки, но у Тома они более интенсивные. Другие звуки, которые издает Том, — это судорожное дыхание, рычание и что-то вроде смеха.

Анимация бездействия Тома заключается в том, что он постоянно дергается и дрожит. Он издает громкий треск всякий раз, когда двигает конечностями. Обычно он принимает ту же позу, с безвольно лежащей головой на правом плече.

Советы

Начинающим игрокам может быть очень трудно уклониться от Тома из-за того, что он атакует не так, как другие дети.

Не смотреть на Тома даже немного дольше, чем нужно.

Игроки должны знать, что Тома не заблокируют препятствия, такие как стены дровяного сарая. Всегда следите за сбоями, чтобы знать, когда отвести взгляд.

Если Том скрывается в поле зрения игрока, они могут посмотреть на него на долю секунды, чтобы заставить его уйти.

Взгляд вниз иногда может быть простым способом уйти от Тома, но это может быть вредным, если Калеб присутствует, вызывая замедление движений и позволяя ему атаковать.

Чтобы уклониться от кругового движения Тома, нужно попытаться найти всегда существующую брешь в рое Томов.

Бывают случаи, когда взгляд вниз заставляет Тома уйти, но бывают и такие моменты, когда игрок должен убежать и по возможности не смотреть на него. Если вы остановитесь в неподходящий момент, Том может вас убить.

Мелочи

Том претерпел множество изменений в процессе разработки игры:

В пре-альфе Wick Тим и Том не собирались носить маски и выглядели совершенно одинаково.

Во время альфы Том вел себя почти так же, как Тим.

Позже, в альфа-версии, Том мог ползать, как паук.

В какой-то момент разработки Тома собирались назвать Донавином.

Том и Тим — единственные дети, которые вместе участвуют в анимации смерти.

Том — единственный ребенок, который испортил зрение игрока.

Том может иногда появляться в анимации смерти других детей. Это вызвано ошибкой в его поведении, но было оставлено разработчиками.

Как ни странно, на семейном фото одежда Тома разорвана еще до того, как он появился в игре.

Еще одно интересное различие между масками близнецов заключается в том, что у маски Тома вырезаны ноздри, а у маски Тима нет. Эту разницу можно увидеть даже в их рисунках.

Вокал Тома был сделан Масео Майром, гейм-дизайнером Wick . Он также озвучивал TBubber.

Каталожные номера

Том

Активный

После подбора маски, погремушки или бандажа для ног

Поведение

Поведение Тома почти не изменилось в No Way Out .

Анимация смерти

Том несколько раз ударил TBub головой.

Описание

Том носит более сильно поврежденную маску, из-за рыхлых швов, едва скрепляющих ее. Коричневые ремни, идущие от маски, прибиты к его голове, прикрепляя маску к лицу. Его волосы редкие, оставляя на нем несколько проплешин. Оба его глаза видны сквозь окровавленную маску. Они постоянно закрыты, левый глаз насильно зашит швами. Изо рта постоянно капает кровь.Его жилет теперь красный, а одежда стала более грязной и рваной. Его левый рукав рубашки полностью оторван. Любопытно, что на жилете у него нет нашивки со школьным гербом.

Раны Тома кажутся более кровавыми, чем обычно. По его шее тянутся странные отметины, похожие на волдыри. Продолжая от них, перед его рубашки покрыт твердым коричневым пятном.

События

Тим и Том появляются в событии, связанном с достижением «Воскресенье».

Следующая информация содержит спойлеры.Чтобы просмотреть их, нажмите на тег [show].

После активации близнецов ТБаббер телепортируется в церковь. Стоя на трибуне, он занимает место пастора МакЭлроя, когда тот проповедует невидимой аудитории. Внезапно появляется темная парящая фигура и разрушает церковь, но пастор продолжает молиться. Двери распахиваются, открывая близнецов. Тим небрежно идет по проходу, а пастор теряет дар речи. Том телепортируется перед пастором и предположительно душит его до смерти.

Мелочи

В основной игре у маски Тома были ноздри, а у его маски No Way Out — нет.

В твите ^[1], раскрывающем рисунок Тома No Way Out , есть отрывок из стихотворения The Hollow Men Т.С. Эллиот ^[2] .

Каталожные номера

Томас Уивер, известный как Том, был мальчиком, который жил на горе Тодд со своей семьей в 1920-х годах. У него был брат-близнец Тим и трое других братьев и сестер: Бенни, Калеб и Лилиан.Его родителями были Джон и Мэри.

Близнецы (третий слева) стоят с другими детьми Уивер.

На фотографии видно, как Том стоит со своими братьями и сестрами перед дровяным сараем семьи, одетые в костюмы для Хэллоуина. То, что кажется простым семейным фото, становится все более сложным и зловещим, когда к нему добавляются другие улики. В интервью с мистером Эдвардсом, приложенном к фотографии, он заявляет, что в летнем лагере Пайн-Крик Бенни, как известно, «проповедовал» о братьях-близнецах, украденных во сне Дьяволом. Кроме того, страница 11 журнала показывает, что не было никаких записей о том, что в семье Уивер были близнецы. Это подтверждается свидетельствами из архива новостей и вырезкой из газеты на странице 21 журнала, в которой упоминается, что у Ткачей всего трое детей. Похоже, близнецы по каким-то причинам были скрыты от общественности, а позже и вовсе исчезли.

Дункан перечислил некоторые теории о природе близнецов Уивер на странице 11:

Близнецы были результатом романа

Близнецы остались сиротами

Они переписывались с легендами о близнецах, разделяющих эмоциональное состояние

У близнецов был «folie à deux», или общий психоз.

На странице 17 дневника пастор Макалрой делает выговор Мэри за то, что она привела «подменышей» к его порогу.На странице 34 журнала (страница Тома) Дункан пришел к выводу, что в этом замешаны «подменыши». В европейском фольклоре подменыш считается существом, подмененным человеческим ребенком феей или другим мифическим существом. На самом деле дети, которых обвиняли в том, что они подменыши, часто имели необъяснимые заболевания или расстройства ^[1] . Из-за этого, а также из-за заявления Бенни о том, что его братья были украдены Дьяволом, возможно, что Тим и Том — подменыши. Звук, сопровождающий страницу 34, показывает, как Мария отчаянно молится Богу, чтобы смыть ее грехи, в то время как двое младенцев плачут.В конце аудио слышен странный рев. Дети, скорее всего, близнецы. Происхождение странного рева неизвестно, но может быть связано с ситуацией с подменышем.

На аудио со страницей журнала 11 (страница Тима) Тим спрашивает Мэри, почему «мы» не можем вернуться домой. Он спрашивает, любит ли она вообще «их» и говорила ли она с Джоном. Он также заявляет, что «здесь так холодно». Он говорит обезумевшим голосом. Возможно, он говорит о себе и своем брате Томе, предполагая, что Мэри не давала мальчикам вернуться домой и заставляла их оставаться снаружи на холоде по неизвестной причине.

Трое других его братьев и сестер, помимо его близнеца, позже стали жертвами странного происшествия, в результате которого сгорел их семейный дом, в результате чего погибла их мать. Их отец повесился в дровяном сарае. Однако дети пропали без вести. Кроме того, их тела так и не были найдены. Вполне возможно, что близнецы пропали без вести задолго до этого события, так как Бенни говорил об их исчезновении, когда был жив. Но похоже, что все они каким-то образом стали жестокими сверхъестественными существами из-за этого события.

Близнецы замешаны в исчезновении многих людей. Один из первых известных зрителям в хронологическом порядке показан в мероприятии «Воскресное богослужение». После того, как пастор МакЭлрой пытается изгнать странное призрачное существо, разрушающее церковь, Тим и Том внезапно появляются, останавливаясь в дверях. Видно, как Тим небрежно идет к подиуму, в то время как Том телепортируется перед пастором и, предположительно, душит его до смерти. В интервью со Стариком Эдвардсом со страницы 17 выясняется, что церковь сгорела дотла, оставив «черную яму», вокруг которой ничего не сгорело.После этого пастора никто не видел.

Позже Том был причастен к исчезновению исследователя паранормальных явлений Трэвиса «ТиБаббера» Бертона. В ночь на Хэллоуин в 2014 году TBubber отправляется в свою последнюю легендарную поездку на территорию Weaver. Он берет детские сувениры и расставляет их в случайных местах на карте, что, казалось, разозлило их дух. После этого ТБуббер очень хотел уйти, но дети устроили ему последнюю погоню, которая привела его к хижине советника в лагере. Кто-то бьет ТБуббера лопатой, убивая его.Его тело так и не было найдено полицией.

Год спустя дети Уиверов противостоят Сэму, который играет Уика по воле своих друзей. Сэм проводит ночь, собирая детские сувениры. Как он умирает, неясно, но его видят с гнилой кожей, стоящим перед детьми, которые кажутся более приветливыми, чем жестокими. Том стоит рядом со своим братом-близнецом и смотрит на Сэма. Можно предположить, что дети устроили ему собственную могилу рядом со своей могилой на кладбище. Полиция так и не нашла его тело.

Ссылки

Галерея

Геймплей

Выхода нет Геймплей
Официальные изображения

Официальное изображение Тома.

Разное

Видео

Аудио

Тема погони Тома в Фитиль :

Тема погони Тома в No Way Out :

Электронная почта и телефон Тима Тома | Заместитель вице-президента IDC

Мы установили стандарт для поиска электронных писем

Нам доверяют более 10.2 миллиона пользователей и 95% индекса S&P 500.

Нам не с чего было начинать. Прочесывание сети в любое время ночи не поможет. RocketReach дал нам отличное место для старта. Наш рабочий процесс теперь имеет четкое направление — у нас есть процесс, который начинается с RocketReach и заканчивается огромным списком контактов для нашей команды продаж..Это, вероятно, экономит Feedtrail около 3 месяцев работы с точки зрения сбора лидов. Теперь мы можем отвлечь наше внимание на то, чтобы на самом деле преследовать клиента!

Отлично подходит для создания списка лидов. Мне понравилась возможность определять личные электронные письма практически любого человека в Интернете с помощью RocketReach. Недавно мне поручили проект, который касался связей с общественностью, партнерства и информационно-разъяснительной работы, и RocketReach не только связал меня с потенциальными людьми, но и позволил оптимизировать мой подход к поиску на основе местоположения, набора навыков и ключевого слова.
— Брайан Рэй , Менеджер по продажам @ Google
До RocketReach мы обращались к людям через профессиональные сетевые сайты, такие как Linkedln.Но нас раздражало то, что нам приходилось ждать, пока люди примут наши запросы на подключение (если они вообще их принимали), а отправка обходится слишком дорого. огромное количество контактов, которые мы смогли найти с помощью RocketReach, платформа, вероятно, сэкономила нам почти пять лет ожидания.

Это лучшая и самая эффективная поисковая система электронной почты, которую я когда-либо использовал, и я пробовал несколько. Как по объему поиска, так и по количеству найденных электронных писем я считаю, что он превосходит другие. Мне также нравится макет, который удобен для глаз, более привлекателен и эффективен. Суть в том, что это был эффективный инструмент в моей работе как некоммерческой организации, направленной на руководство.

До RocketReach процесс поиска адресов электронной почты состоял из поиска в Интернете, опроса общих друзей или поиска в LinkedIn.Больше всего разочаровывало то, сколько времени все это занимало. Впервые я воспользовался RocketReach, когда понял, что принял правильное решение. Поиск электронных писем для контактов превратился в разовый процесс, а не в недельный процесс.

Поиск электронных писем для целевого охвата был ручным и отнимал очень много времени. Когда я попробовал RocketReach и нашел бизнес-информацию о ключевых людях за считанные секунды в простом и беспроблемном процессе, я попался на крючок! Инструмент сократил время установления контакта с новыми потенциальными клиентами почти на 90%.

Тим Уокер

Тим Уокер прославился в середине 1990-х благодаря своим творческим и фантастическим фотографиям, вдохновленным его любовью к сказкам и жаждой приключений. С тех пор его яркие фэшн-фотографии и неповторимые портреты украшали страницы таких журналов, как Vogue, Vanity Fair, W, LOVE, Another Man и i-D. Он опубликовал семь книг и организовал персональные выставки в крупных музеях.Его короткометражные фильмы и проекты с музыкантами получили международное признание.

Уокер родился в Англии в 1970 году и начал фотографировать еще мальчиком. Год работы в архиве Сесила Битона в библиотеке Condé Nast в Лондоне вдохновил его на изучение фотографии в Эксетерском колледже искусств. После получения степени он продолжил оттачивать свое мастерство в качестве ассистента фотографа Ричарда Аведона в Нью-Йорке. Уокер снял свой первый рассказ для британского Vogue, когда ему было всего 25 лет, и он начал строить творческие отношения, которые продолжаются и по сей день.

Он стал известен своими роскошными картинами и амбициозными сюжетными съемками по всему миру. Поборник новых талантов и нетрадиционной красоты, он давно сотрудничает с моделями и исполнителями, включая Эди Кэмпбелл, Карен Элсон, Кейт Мосс и Тильду Суинтон. Проработав много лет с необычными декорациями и реквизитом, он поставил перед собой задачу создать портреты в простом белом пространстве. Каждый портрет требует тщательной подготовки: Уокер тщательно исследует мотивы и страсти модели, чтобы запечатлеть их суть в одном изображении.

В 2010 году премьера его первого короткометражного фильма «Пропавший исследователь» состоялась на кинофестивале в Локарно в Швейцарии, а позже он стал лучшим короткометражным фильмом на кинофестивале в Чикаго. Затем последовали еще пять фильмов; совсем недавно был поставлен балет по рассказу Ганса Христиана Андерсена «Стойкий оловянный солдатик». Уокер регулярно сотрудничает с исполнителями и музыкантами, создавая официальное видео для Blissing Me из альбома Бьорк Utopia (2017), а также снимая обложки для альбомов Кейт Буш Director’s Cut (2011) и Гарри Стайлса Fine Line (2019).

В последние годы Уокер исследовал тему обнаженной натуры, смешивая современные и исторические мотивы в соответствии с историческим каноном искусства. В 2015 году он получил заказ на создание новой амбициозной серии картин для The Nicola Erni Collection, Швейцария. Черпая вдохновение из «Сада земных наслаждений» голландского художника Иеронима Босха (1450–1516), фотографии Уокера вызывают мрачное сюрреалистическое и чувственное настроение оригинальных работ Босха. Изображения были напечатаны на огромных холстах с левкасом и выставлены в музее Нордбрабантс в городе Хертогенбос, на родине Босха, в ознаменование 500-летия со дня смерти художника.

Музей Виктории и Альберта (V&A) пригласил Уокера для создания большого количества работ, вдохновленных его эклектичной коллекцией. Получившуюся в результате выставку «Тим Уокер: Замечательные вещи» (2019–2020 гг.) увидели почти 200 000 посетителей, и до 2022 г. она гастролирует по музеям мира. Среди его предыдущих выставок — ретроспективы «Тим Уокер: картинки в Музее дизайна» (2008 г.) и «Рассказчик». в Сомерсет-Хаусе (2012-2013). Фотопринты Уокера находятся в частных коллекциях и в государственных учреждениях, включая V&A и лондонскую Национальную портретную галерею.

Комплекс TIM/TOM – обзор

5 Связь PD и митохондриального транспорта: митохондриальная дисфункция вызывает остановку митохондрий гены, вызывающие БП, взаимодействуют с митохондриальным транспортом. Сами митохондрии долгое время были подозреваемыми в БП. Одной из первых ссылок было наблюдение, что 1-метил-4-фенил-1,2,3,4-тетрагидропиридин (MPTP) вызывает ДОФА-чувствительный паркинсонизм с потерей дофаминергических нейронов
⁹⁵ и является мощным ингибитором комплекса I. .⁹⁶ Как было рассмотрено в главе 2, в настоящее время известно, что некоторые другие митохондриальные токсины вызывают симптомы, подобные болезни Паркинсона, включая паракват, 1-метил-4-фенилпиридиний (MPP+) и ротенон. Недавние данные показали прямую связь между митотоксинами и дефицитом митохондриального транспорта: MPP+ ⁹⁷ влияет на аксональный транспорт митохондрий, когда препарат применяется конкретно в аксонах с использованием микрожидкостных устройств. Митохондриальная остановка явно была вторичной по отношению к нарушенной митохондриальной функции.

Самая прямая и механистическая связь между болезнью Паркинсона, митохондриальным повреждением и остановкой митохондрий установлена при исследовании PINK1 (PTEN-индуцированная предполагаемая киназа; кодируется человеческим геном PARK6 ) и паркина (кодируется PARK2 ). Как подробно представлено в главе 5 и рассмотрено в другом месте ^98–100, эти белки являются частью пути, запускающего митофагический клиренс митохондрий с нарушенным мембранным потенциалом или скоплением белков с неправильной укладкой. PINK1 представляет собой митохондриальную киназу, расположенную на хромосоме 1p36 и связанную с аутосомно-рецессивным ювенильным паркинсонизмом (ARJP). ¹⁰¹ Выявлено более 70 мутаций PINK1, которые могут вызывать паркинсонизм. Многие мутации PINK1 изменяют или устраняют киназный домен и, следовательно, являются мутациями с потерей функции, и, по крайней мере, некоторые болезнетворные мутации влияют на домен, нацеленный на митохондрии, как описано в работах [102–104]. Паркин представляет собой цитозольную лигазу E3, а также причинный ген для ARJP, ¹⁰⁵ с более чем 100 патогенными мутациями, о которых сообщалось на сегодняшний день.¹⁰³ Пионерские генетические исследования Drosophila и последующий анализ клеток млекопитающих и моделей грызунов продемонстрировали, что PINK1 и паркин действуют линейно для контроля качества митохондрий. Этот путь также вызывает остановку митохондрий. ⁶¹

Вкратце, PINK1 обычно поддерживается на низком уровне и быстро инактивируется в здоровых клетках путем импорта в митохондрии через комплексы TOM/TIM. Этот импорт запускает его расщепление и деградацию митохондриальными протеазами, такими как протеаза митохондриального процессинга (MPP) и ромбовидноподобная протеаза, ассоциированная с пресенилином (PARL), и, после ретротранслокации фрагментов обратно в цитозоль, по пути N-правила.^106–111 Поскольку митохондриальный импорт требует потенциала митохондриальной мембраны и может быть ингибирован неправильно свернутыми белками, эти условия предотвратят деградацию PINK1 и стабилизируют его на поверхности митохондрий. Таким образом, импорт и деградация PINK1 становится датчиком, обнаруживающим дисфункциональные митохондрии. Среди основных эффектов стабилизации PINK1 — фосфорилирование и активация паркина, рекрутирование паркина из цитозоля на поверхность митохондрий и фосфорилирование убиквитина на белках внешней митохондриальной мембраны.^112–114 Последующее усиление фосфоубиквитинирования активирует путь митофагии. ^115,116 Паркин также важен для контроля качества митохондрий благодаря более ограниченному механизму образования везикул митохондриального происхождения. ⁵⁴

PINK1 и Parkin также регулируют митохондриальный транспорт (рис. 4.3), и это обеспечивает интригующую прямую связь между PD и митохондриальным транспортом. Беспристрастный подход к идентификации интеракторов PINK1 с помощью коиммунопреципитации показал, что Miro2/RhoT2 и Milton образуют комплекс с PINK1.¹¹⁷ Позднее было обнаружено, что паркин также может связываться с этим комплексом, и ассоциация как PINK1, так и паркина с моторно-адапторным комплексом может быть значительно усилена, если митохондрии деполяризуются для активации PINK1. ⁶¹ PINK1 может фосфорилировать Miro, а Parkin может убиквитинировать Miro, и вместе эти действия вызывают протеасомную деградацию Miro. ^61,118 Способность протеасомных ингибиторов предотвращать деградацию Miro отличает ее от митофагической деструкции митохондриальных белков, которая зависит от лизосом, а не от протеасомы.Причем потеря Миро происходит в условиях и в моменты времени, когда митофагия не наблюдается. Поскольку Miro необходим для закрепления milton и моторных белков на митохондриальной мембране, деградация Miro высвобождает их в цитозоль и тем самым необратимо останавливает движение митохондрий (рис. 4.3). Сверхэкспрессия либо PINK1, либо паркина вызывает остановку митохондриального транспорта в нейронах гиппокампа крысы и в моторных нейронах дрозофилы . ⁶¹ Для действия PINK1 требуется присутствие паркина, но сверхэкспрессия паркина может остановить подвижность митохондрий даже на нулевом генетическом фоне PINK1 в моделях Drosophila или грызунов, как и ожидается для пути, в котором PINK1 действует выше паркина.

Рисунок 4.3. PINK1 и Parkin останавливают поврежденные митохондрии перед митофагией.

Здоровые митохондрии экспрессируют моторно-адапторный комплекс миро, милтона, кинезина и динеина на своей внешней мембране. Деполяризация митохондрий заставляет PINK1 и Parkin связываться и фосфорилировать Miro. Последующая деградация Miro протеасомой высвобождает milton и моторы из органеллы, которые впоследствии могут быть окружены аутофагосомными мембранами.
Источник: Изображение предоставлено Химанишем Басу.
В настоящее время неясно, отвечает ли этот путь за текущую регуляцию митохондриальной подвижности или он задействован только в качестве прелюдии к митофагии или при избыточной экспрессии белков. Культивируемые нейроны гиппокампа от животных с нокаутом PINK1 или Parkin имели нормальные уровни митохондриального движения и нормальные скорости. ⁶¹ У Drosophila РНКи-нокдаун PINK1 и Parkin увеличивал подвижность митохондрий в одном исследовании ⁶¹, но не в другом.¹¹⁹ Значение Drosophila Miro как мишени PINK1, однако, было продемонстрировано наблюдением, что подавления Miro было достаточно, чтобы спасти вызванную мутантами PINK1 дегенерацию DA нейронов. ¹¹⁸ Это открытие предполагает, что неправильное движение митохондрий в отсутствие PINK1 может привести к гибели нейронов. Сходным образом, у мух, у которых Miro был сделан устойчивым к фосфорилированию путем мутации предполагаемых сайтов фосфорилирования PINK1 в аланины, митохондриальный транспорт был увеличен, а дофаминергические нейроны уменьшены. ¹²⁰ В совокупности эти наблюдения предполагают, что регуляция Miro с помощью пути PINK1/Parkin регулирует митохондриальную динамику в нейронах Drosophila и что этот контроль необходим для выживания нейронов.

Наиболее важной функцией деградации Miro с помощью PINK1 и Parkin может быть остановка движения поврежденных митохондрий в качестве прелюдии к митофагии. Ашрафи и др. ⁵⁷ обнаружили, что повреждение подмножества митохондрий в аксонах — либо в результате продукции АФК с помощью mitoKillerRed, либо в результате воздействия антимицина А — приводит к тому, что митохондрии перестают двигаться, фрагментируются и впоследствии поглощаются аутофагосомами.Все это происходило локально внутри аксона, и для всего этого требовались как PINK1, так и Parkin. Остановка движения в результате деградации Miro может работать параллельно с другим нижестоящим действием PINK1 и Parkin: остановкой слияния митохондрий за счет деградации митофузина. Митофузин, как и миро, является субстратом как для PINK1, так и для паркина и быстро расщепляется протеасомой. ^121-124 Таким образом, кажется вероятным, что в поврежденных митохондриях с плохим мембранным потенциалом или неправильно свернутыми белками PINK1 и Parkin заставляют митохондрии перестать двигаться и сливаться друг с другом, быстро направляя Miro и mitofusin для деградации.

Каким образом PINK1/Parkin контролирует митохондриальную динамику, таким образом, связанную с выживанием нейронов? Самая простая гипотеза состоит в том, что деградация Miro и mitofusin служат для изоляции поврежденных митохондрий, чтобы подготовить их к митофагии. В отсутствие вызванной PINK1 остановки митохондрий поврежденные митохондрии перемещаются по аксону. Распространение поврежденных митохондрий само по себе может вызвать повреждение, поскольку они, вероятно, действуют как источники окислительного стресса. Подвижные поврежденные митохондрии также могут сливаться со здоровыми органеллами, эффективно распространяя заражение митохондриальных повреждений.Со временем повреждение может возрасти до уровня, который поставит под угрозу выживание аксонов.

No related posts.